prou
Prodotti
Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG HCB5144E Image Dehru
  • Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG HCB5144E
  • Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG HCB5144E

Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG


Cat Nru: HCB5144E

Pakkett: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Enżima tal-bidu sħun modifikata bl-antikorpi, 95°C, 1-5min hot start

Sejbien qPCR multi-kanali multipli ta 'miri differenti

Amplifikazzjoni ta 'sensittività għolja ta' mudelli ta 'RNA ta' konċentrazzjoni baxxa

Amplifikazzjoni rapida

Deskrizzjoni tal-prodott

Dettall tal-prodott

Cat Nru: HCB5144E

Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG huwa żviluppat speċifikament għal proċessi ta 'lyophilization, applikat għal kwantifikazzjoni tal-fluworexxenza (sonda TaqMan) skoperta ta' amplifikazzjoni RNA li fiha neoscript reverse transcriptase u DNA Polymerase ta 'amplifikazzjoni rapida miksuba b'modifikat ġenetikament u screening li jista' jlesti l-amplifikazzjoni tal-PCR fi żmien 20 -40 minuta.Dan ir-reaġent jippreforma tolleranza għolja ta 'inibitur, li għandha traskrizzjoni inversa ogħla u effiċjenza ta' amplifikazzjoni PCR, adattata għal amplifikazzjoni ta 'sensittività għolja ta' kampjuni ta 'RNA b'konċentrazzjoni baxxa.Kurva standard tajba tista 'tinkiseb f'firxa kwantitattiva wiesgħa, u l-kwantifikazzjoni tista' titwettaq b'mod preċiż.Dan ir-reaġent juża enzima mħallta ta 'enżima ta' amplifikazzjoni kontra l-inibizzjoni u enzima UNG, kif ukoll sistema buffer ottimizzata li fiha dUTP.Jista 'mhux biss jikseb amplifikazzjoni tajba tal-ġene fil-mira f'kampjuni li jkun fihom inibituri, iżda wkoll jipprevjeni b'mod effettiv amplifikazzjoni pożittiva falza kkawżata minn residwu tal-PCR u tniġġis tal-ajrusol.Dan ir-reaġent huwa kompatibbli mal-biċċa l-kbira tal-istrumenti PCR kwantitattivi fluworexxenti, bħal Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche eċċ.Dan ir-reaġent jista 'jintuża għal-liofilizzazzjoni biex tinkiseb forma lajofilizzata tajba u stabbiltà tal-prodott.


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • Kompożizzjoni tar-reaġent

    1. 12.5×FastAmpli Part Taq/UNG Mix (b'dNTPs) (DG)

    2. 50 × FastAmpli Parti RTase (DG)

    3. 5 ×FastAmpliRT Buffer (DG)

    4. 4 ×lyoprotectant (mhux obbligatorju) (DG)

     

    Kundizzjonijiet tal-Ħażna

    Jista 'jinħażen f'-20 ℃ għal żmien twil, f'4 ℃ sa 3 xhur.Ħallat sew qabel l-użu u Evitafriża-tidwib frekwenti.

     

    Protokoll taċ-ċikliżmu

     

    Pass

     

    Temperatura

    PCR regolari Proċedura

    PCR veloċiProċedura

     

    Ċikli

    Tul ta' żmien

    Tul ta' żmien

    ReverseTraskrizzjoni

    50℃

    15 min

    5 min

    żomm

    PolimerażiAttivazzjoni

    95℃

    1-5 min

    1-2 min

    żomm

    Denaturazzjoni

    95℃

    10-20 s

    1-3 sek

    40-50

    Ittemprar/Estensjoni

    56-64℃

    20-60 s

    3-20 sek

     

    Reazzjoni Likwida RT-qPCRSistema tal-joni

    Kompożizzjoni

    25µL Volum

    50µL Volum

    Konċentrazzjoni

    5 × FastAmpli RT Buffer

    5µL

    10µL

    12.5×FastAmpli Parti Taq/Ħallat UNG (b'dNTPs)

    2µL

    4µL

    50 × FastAmpli Parti RTase

    0.5µL

    1µL

    4×lyoprotectant

    6.25µL

    12.5µL

    25 × Taħlita tal-Primer-Probe

    1µL

    2µL

    Mudell RNA

     

     

     

    ddH2O

    Sa 25µL

    Sa 50µL

    1. Din is-sistema hija sistema ta 'lijofilizzazzjoni;Meta l-klijenti jużaw din is-sistema mingħajr rekwiżiti ta 'lyophilization, 4×lyoprotectant jista' jiġi miżjud b'mod selettiv;Jekk ikun hemm il-prodotti lajofilizzati meħtieġa, waqt il-validazzjoni tal-prestazzjoni tal-prodott tal-istadju tar-reaġenti likwidi, għandha żżid 4×lyoprotectant biex tiżgura konsistenza mal-komponenti u l-effetti tas-sistema lajofilizzata.

    2. Meta tuża proċedura PCR regolari, il-konċentrazzjoni finali tal-primer hija ġeneralment 0.2μM.Għal riżultati aħjar, il-konċentrazzjoni tal-primer tista 'tiġi ottimizzata fil-medda ta' 0.2- 1.0μM.Il-konċentrazzjoni tas-sonda tista 'tiġi ottimizzata fil-medda ta' 0.1-0.3μM.Jistgħu jsiru esperimenti ta 'gradjent ta' konċentrazzjoni biex tinstab l-aħjar kombinazzjoni ta 'primers u sondi.

    3. Meta tuża metodu ta 'amplifikazzjoni ta' PCR veloċi, jista 'jinkiseb riżultat aħjar billi tiżdied il-konċentrazzjoni tal-primer/sonda, kif ukoll jiġi aġġustat il-perċentwal ta' primer u sonda.

    4. Tipi differenti ta 'mudelli fihom numru ta' kopji differenti ta 'ġene fil-mira.Tista' ssir dilwizzjoni gradjent biex jintgħażel l-ammont xieraq ta' żieda tal-mudell ottimali, jekk meħtieġ.

     

    Preparazzjoni tas-sistema tal-lijofilizzazzjoni

    Kompożizzjoni

    25µL Reazzjoni Sistema

    5 × FastAmpli RT Buffer

    5µL

    12.5×FastAmpli Part Taq/UNG Mix (b'dNTPs) (DG)

    2µL

    50 × FastAmpli Parti RTase (DG)

    0.5µL

    4 × Lyoprotectant

    6.25µL

    25 × Taħlita tal-Primer-Probe

    1µL

    ddH2O

    Għal 18 ~ 20µL

    * Jekk hemm bżonn ta' sistemi oħra għal-lijofilizzazzjoni, jekk jogħġbok ikkonsulta separatament.

     

    Lijofilizzazzjoni Process

    Proċedura

    Temp.

    Ħin

    Kundizzjoni

    Pressjoni

     Iffriżar

    4℃

    30 min

    Żomm

     1 atm

    -50℃

    60 min

    Tkessiħ

    -50℃

    180 min

    Żomm

     Tnixxif Primarju

    -30℃

    60 min

    Tisħin

     Vakwu Aħħari

    -30℃

    720 min

    Żomm

    Tnixxif Sekondarju

    25℃

    60 min

    Tisħin

     Vakwu Aħħari

    25℃

    300 min

    Żomm

    1. Dan il-proċess ta 'lijofilizzazzjoni huwa proċess ta' tnixxif bil-friża fuq il-post għal sistema ta 'reazzjoni ta' 25µL;jekk huma meħtieġa żibeġ ta 'tnixxif bil-friża jew proċessi oħra ta' tnixxif bil-friża fuq il-post, jekk jogħġbok staqsa separatament.

    2. Il-proċess ta 'lijofilizzazzjoni ta' hawn fuq huwa għal referenza biss.Tipi ta 'prodotti differenti u freeze-drivers differenti għandhom parametri differenti, għalhekk jistgħu jsiru aġġustamenti skont il-kundizzjonijiet attwali waqt l-użu.

    3. Proċessi differenti ta 'lijofilizzazzjoni jistgħu jkunu adattati għal prodotti lajofilizzati ta' daqsijiet differenti ta 'lott, għalhekk trid titwettaq validazzjoni tal-ittestjar suffiċjenti meta tintuża għal produzzjoni fuq skala kbira.

     

    Istruzzjoni għall-użu ta 'lyophiliztrab ed

    1. Iċċentrifuga fil-qosor it-trab lajofilizzat;

    2. Żid il-mudell tal-aċidu nuklejku mat-trab lajofilizzat u żid ilma sa 25µL;

    3. Ħallat sew biċ-ċentrifugazzjoni u ħaddem il-magna.

     

    Kontroll tal-Kwalità

    1. Ittestjar funzjonali: sensittività, speċifiċità, riproduċibbiltà ta 'RT-qPCR.

    2. L-ebda attività nukleażi eżoġena, l-ebda kontaminazzjoni eżoġena ta 'endo/exonuclease.

     

    Informazzjoni Teknika:

    1. Ir-rata ta 'amplifikazzjoni tad-DNA polimerażi mgħaġġla mhix inqas minn 1kb/10s.Strumenti differenti tal-PCR għandhom veloċitajiet differenti ta 'tisħin u tkessiħ, modi ta' kontroll tat-temperatura u konduttività termali, u b'hekk l-ottimizzazzjoni tal-konċentrazzjoni primer/sonda tiegħek u l-metodu ta 'tħaddim flimkien mal-istrument tal-PCR mgħaġġel speċifiku tiegħek hija essenzjali.

    2. Il-ħin tat-traskrizzjoni inversa huwa ottimizzat skont it-tul tal-framment li jrid jiġi amplifikat.Għal frammenti itwal, il-ħin tat-traskrizzjoni inversa jista 'jiġi estiż b'mod xieraq.

    3. It-temperatura tal-estensjoni tal-ittemprar għandha tiġi ottimizzata abbażi tal-valur Tm tas-sonda tal-primer u l-kundizzjonijiet attwali tar-reazzjoni.

    4. Għal primers b'temperatura ta 'ttemprar aktar baxxa jew itwal minn frammenti ta' 200 bp, huwa rakkomandat metodu ta '3 stadji.

    5. Jekk jogħġbok uża żoni u pipetti ddedikati qabel u wara l-amplifikazzjoni, ilbes ingwanti u ibdelhom spiss;tiftaħx it-tubu tar-reazzjoni wara li titlesta r-reazzjoni tal-PCR biex timminimizza l-kontaminazzjoni tal-kampjuni mill-prodotti tal-PCR.

    6. L-effiċjenza tal-użu tad-dUTP u s-sensittività għall-enzima UNG huma differenti għal ġeni fil-mira differenti, għalhekk jekk l-użu tas-sistema UNG iwassal għal tnaqqis fis-sensittività ta 'skoperta, is-sistema ta' reazzjoni għandha tiġi aġġustata u ottimizzata.Jekk ikun meħtieġ appoġġ tekniku jekk jogħġbok ikkuntattjana.

     

    Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibgħatilna