prou
Prodotti
N-Glycan Kit HCP0031A Stampi Dehru
  • Kit N-Glycan HCP0031A

Kit N-Glycan


Cat Nru: HCP0031A

Pakkett: 5T/24T/96T

Dan id-dokument jipprovdi informazzjoni dwar il-kura ġenerali u l-użu ta 'N-Glycan Kit għar-rilaxx enżimatiku mgħaġġel u t-tikkettar rapidu ta' N-glycans.

Deskrizzjoni tal-prodott

Data tal-prodott

Deskrizzjoni tal-prodott

Dan id-dokument jipprovdi informazzjoni dwar il-kura ġenerali u l-użu ta 'N-Glycan Kit għar-rilaxx enżimatiku mgħaġġel u t-tikkettar rapidu ta' N-glycans.Dan il-protokoll huwa vvalidat bl-użu ta 'antikorpi monoklonali u ġie ttestjat ukoll biex iwettaq għal firxa wiesgħa ta' glikoproteini N-linked oħra.Nirrakkomandaw lill-utent biex jikkonferma r-rilaxx enżimatiku għall-kampjun partikolari tiegħu.


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • Komponenti

    N-Kit Glycan (24T)

    Modulu

    Component

    HCP0031A

     

    Modulu tad-Deglycosylation

    HCP0031A-1

    IgG

    1.2 mg

    PNGase F

    45µL

    PNGase F buffer

    0.5mL

    Surfactant

    1.2mg * 6

    Modulu tat-Tikkettar

    HCP0031A-2

    Trab tar-reaġent MS

    8.2mg * 3

    DMF anidruż

    1mL

    Modulu tat-tindif

    HCP0031A-3

    Pjanċa ta' Elużjoni (96well)

    biċċa 1

    Buffer tal-Eluzzjoni

    5mL* 1

    Dilwent tal-Kampjun

    5mL* 1

     

    Modulu tal-Ġbir tal-Kampjuni

    HCP0031A-4

    Strixxi ta' 8 tubi (200μL)

    100 biċċa

    Strixxi ta' 8 għatu

    100 biċċa

    Pjanċa tal-ġbir (96well)

    biċċa 1

    Trej tal-iskart

    biċċa 1

    Protokoll

    L-utent jeħtieġ li jipprepara hawn taħt ir-reaġenti u l-apparati qabel ma tibda (Kampjun IgG wieħed bħala eżempju):

    (1) 0.85% Nacl, 100µL;aċetonitrile (grad LC-MS) ;ilma ultrapur;

    (2)15/85=soluzzjoni ta 'ilma ultrapura/aċetonitrile (v/v), 2mL;1/9/90 = aċidu formiku/ilma ultrapur/aċetonitrile (v/v), 20mL;format tal-ammonju 50 mM, PH=4.4, 500mL;

    (3) Pompa tal-vakwu SPE;96-well-plate proċessur pressjoni negattiva jew proċessur pressjoni pożittiva;Modulu tat-tisħin jew banju tal-metall (90℃ u 50℃);vortex mixer;pipetta.

     

    Pass 1: Deglycosylation Rapida

    (1) Ħallat kampjun IgG b'0.85% Nacl biex tikseb konċentrazzjoni finali IgG f'2mg/mL.

    (2) PNGase F buffer: ħallat 1 surfactant kunjett (1.2mg/3.6mg) b'(24μL/72μL))PNGase F buffer, ħallat u aħżen f'temperatura tal-kamra (din is-soluzzjoni jeħtieġ li tipprepara qabel l-użu).

    (3) Żid 20μL soluzzjoni IgG għal 200μL tubu ta 'reazzjoni, żid 3μL PNGase F buffer, pipetta 'l fuq u' l isfel biex tħallat u mbagħad żid 3.3μL ilma ultrapur, aspira u xerred biex tħallat.

    (4) Żid is-soluzzjoni kollha ta 'hawn fuq mal-modulu tat-tisħin f'90℃, 3 minuti, żnaturaha, u mbagħad oħroġ mill-modulu tat-tisħin, u kessaħ għal 3 minuti f'temperatura tal-kamra.

    (5) Żid 1.2μL PNGase F, aspira u xerred biex tħallat, saħħan 50℃, 5 minuti b'modulu tat-tisħin.L-utent jista 'jħejji reaġent tat-tikkettar waqt li jistenna.

    (6) Oħroġ mill-modulu tat-tisħin, u mbagħad kessaħ għal 3 minuti f'temperatura tal-kamra.

     

    Pass 2. Tikkettjar Rapidu ta 'Glycosylamines

    (1) Soluzzjoni tar-reaġent tat-tikkettar: ħallat reaġent tat-tikkettar ta 'kunjett wieħed (8.2mg/24.6m) b'DMF anidru (60. 13μL/180.4μL), din is-soluzzjoni jeħtieġ li tiġi ppreparata qabel l-użu), aspira u xerred 5-10 darbiet biex tiżgura ir-reaġent jinħall għal kollox.

    (2) Żid 6μL soluzzjoni ta' reaġent tat-tikkettar mat-tubu tar-reazzjoni, aspira u xerred 5-10 darbiet biex tiżgura t-taħlit, u mbagħad ħalli r-reazzjoni tat-tikkettar tipproċedi fil-kamra

    temperatura għal 5 minuti.

    (3) Żid 179 μL acetonitrile, ħawwad għall-pass li jmiss.

     

    Pass 3: Tindif ta ' Ittikkettat Glycosylaminjieri

    (1) Waħħal proċessur ta 'pressjoni negattiva jew proċessur ta' pressjoni pożittiva u pjanċa ta 'eluzzjoni ta' 96-bir.

    (2) Bjar tal-kondizzjoni: żid 200μL ilma ultrapur mal-pjanċa tal-elużjoni biex tikkondizzjona l-bjar, iġbor l-iskart mit-trej tal-iskart.

    (3) Ekwilibrat il-bjar: żid 200μL 15/85 soluzzjoni ta 'ilma/aċetonitrile (v/v) biex tequilibra l-bjar, iġbor l-iskart bit-trej tal-iskart.

    (4) Tagħbija tal-kampjun: Tgħabbi l-kampjuni dilwiti tal-acetonitrile u iġbor l-iskart bit-trej tal-iskart.

    (5) Aħsel il-bjar b'600μL 1/9/90 aċidu formiku/ilma ultrapur/acetonitrile (v/v) darbtejn u iġbor l-iskart bit-trej tal-iskart.

    (6) Neħħi t-trej tal-iskart, u biddel għal pjanċa tal-ġbir.

    (7) Aħsel iċ-ċellula b'50μL buffer ta' eluzzjoni, eluti glycans mal-pjanċa tal-ġbir, u rrepeti dan il-pass.

    (8)Żid 200μL dilwent tal-kampjun, ħallat.

    Pass 4. HILIC-FLR

    (1) Kolonna tal-kromatografija: ACQUITY UPLC® Glycan BEH Amide, 130 Å, 1.7 μm, 2. 1 x 150 mm (ilmijiet parti #186004742).

    (2) Temperatura tal-kolonna: 60 °C

    (3) Fażi likwida A: soluzzjoni ta 'format ta' l-ammonju 50 mM (grad LC-MS huwa rakkomandat), pH=4.4.

    (4) Fażi likwida B: 100% acetonitrile (grad LC-MS huwairrakkomandat).

    (5) Rata tal-fluss: 0.4 mL/min;

    (6) Gradjent:

    Ħin (min)

    Rata tal-fluss (mL/min)

    %A

    %B

    Kurva

    0

    0.4

    25

    75

    6

    35

    0.4

    46

    54

    6

    36.5

    0.2

    100

    0

    6

    39.5

    0.2

    100

    0

    6

    43. 1

    0.2

    25

    75

    6

    47.6

    0.4

    25

    75

    6

    55

    0.4

    25

    75

    6

    (7)FLR wavelengths: EX 265/EM 425 nm

    (8)Rata ta 'kampjunar FLR: 2 Hz

    (9)Vol. Injezzjoni: 10μL

    Jekk jogħġbok innota li l-parametri ta 'hawn fuq ibbażati fuq il-magna mgħammra b'LCMS "ACQUITY® RDa", l-utent jista' jaġġusta l-parametru kif xieraq fuq tagħmir ieħor.

     

    Storage

    Reaġent

    Ħażna

    IgG

    2-8℃, 12-il xahar

    PNGase F

    -25 ~ – 15℃℃, 12-il xahar, evita

    ċikli ta’ ffriżar/tidwib

    PNGase F buffer

    2-8℃, 12-il xahar

    Surfactant

    Temperatura tal-kamra, 12-il xahar

    Reaġent MS Trab

    2-8℃, 12-il xahar, żomm fid-dlam

    DMF anidruż

    Temperatura tal-kamra, 12-il xahar

    Buffer tal-Eluzzjoni

    Temperatura tal-kamra, 12-il xahar

    Dilwent tal-kampjun

    Temperatura tal-kamra, 12-il xahar

    Pjanċa ta' elużjoni ta' 96 tajjeb

    It-temperatura tal-kamra, ladarba jinfetaħ, il-bir mhux użat jeħtieġ li jiġi ssiġillat bil-film tal-paraffin tal-plastik u jżomm dessikant f'temperatura tal-kamra

    200μL strixxi ta '8 tubi, strixxi ta'

    8 tappijiet, pjanċa tal-ġbir ta '96 bir, trej tal-iskart

    Temperatura tal-kamra, 96 bir-ġbir

    pjanċa tkun issiġillata u żomm dessikant f'temperatura tal-kamra

     

    Noti

    Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowt tal-laboratorju u ingwanti.

    Uża pariri nodfa kull darba

    Jekk jogħġbok segwi l-manwal biex taħżen u tuża r-reaġenti

     

    Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibgħatilna