prou
Prodotti
T7 RNA Polymerase HCP1011A Dehru Immaġni
  • T7 RNA Polymerase HCP1011A

T7 RNA Polymerase


Cat No.:HCP1011A

Pakkett: 100μL/1mL/10mL/100mL

T7 RNA Polymerase hija RNA polymerase dipendenti mid-DNA minn T7 phage

Deskrizzjoni tal-prodott

Data tal-prodott

T7 RNA Polymerase hija RNA polymerase dipendenti mid-DNA minn T7 phage, li tippossjedi attività qawwija u speċifika ta' RNA polymerase 5'→ 3'. jiddaħħal 'l isfel minn promotur.


  • Preċedenti:
  • Li jmiss:

  • Komponenti

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    10 × HH T7 Buffer

    Kundizzjonijiet tal-ħażna

    Trasport taħt 0 °C u ħażna f'-25 ~ - 15 °C.

    Speċifikazzjoni

    Isem tal-Prodott

    T7 RNA Polymerase

    Karatterizzazzjoni tal-prodott

    Likwidu ċar

     

    Definizzjoni ta' unità ta' attività

    Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta 'enżima

    li se jikkatalizza NTP biex jipproduċi 1 nmol PPi in

    1 siegħa f'37 ° C taħt is-sistema ta 'reazzjoni standard.

    Buffer tal-ħażna

    50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 20 mM β-M, 1 mM EDTA, 50% Glycerol ,0.1% (w/v)

    Triton® X- 100, pH 7.9 @ ​​25°C.

     

    10 × HH T7 buffer

    400 mM Tris-HCl (25℃, pH 8.20), 60 mM

    MgCl2, 100 mM DTT, 20 mM spermidine.

    Kondizzjoni tal-ħażna

    -25 ~ - 15℃, evita iffriżar-tidwib ripetut

     

    Reazzjoni u Kundizzjoni

    Reazzjoni konvenzjonali

    Reaġent

    Ammont

    H2O mingħajr nukleażi jew ilma trattat b'DEPC

    Sa 20 μL

    10 × HH T7 Buffer

    2 μL

    ATP/GTP/CTP/UTP (100 mM kull wieħed)

    0.4 μL kull wieħed (2 mMeach Finali)

    Inibitur RNase (40 U/μL) (mhux obbligatorju)

    1 μL (40 U)

    Pyrophosphatase Inorganiku (mhux obbligatorju)

    0.5 μL (0.05U)

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    1 μL

    Mudell tad-DNA linearizzat

    1 μg

    Żid il-komponenti tar-reazzjoni fl-ordni ta 'hawn fuq * 10 × HH T7 Buffer huwa adattat biss għal NTPs 2mM, kits oħra ta' traskrizzjoni T7 ta 'Rendiment Għoli huma rakkomandati għal NTPs 7.5mM- 10mM.

    Ħin ta' Inkubazzjoni:37 °C għal sagħtejn.

    Stop tar-Reazzjoni: Żid 2μL 0.2 M EDTA (pH8.0@25℃) jew saħħan sa 75 °C għal 10min.

    Tneħħija tad-DNA: Il-mudell tad-DNA jista 'jitneħħa b'2U DNase I (mingħajr RNase) u inkubazzjoni għal 15-il minuta f'37 °.

     

    Kontroll tal-kwalità

    Attività Endonuclease: L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50μL li jkun fiha minimu ta' 50U ta' T7 RNAPolymerase b'1 μg λDNA għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.

    Attività Exonuclease: L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50μL li fiha minimu ta' 50U ta' T7 RNA Polymerase b'1 μg λ -Hind Ⅲ diġest DNA għal 16-il siegħa f'37℃ ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.

    Nickase Attività: L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50μL li fiha minimu ta' 50U ta' T7 RNA Polymerase b'1μg pBR322 DNA għal 16-il siegħa f'37°C ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.

    RNase Attività: L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50μL li fiha minimu ta' 50U ta' T7 RNA Polymerase b'1.6μg MS2 RNA għal 16-il siegħa f'37°C ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.

    Inattivazzjoni tas-Sħana: 75 °C għal 10 min.

     

    Prekawzjoni

    • Ir-reazzjoni ta' traskrizzjoni għandha titwettaq f'ambjent ħieles minn kontaminazzjoni RNase.Liebes ingwanti huwa rakkomandabbli.It-truf, it-tubi u l-ilma għandhom ikunu ħielsa minn nukleażi.

    • Ir-rendiment tal-produzzjoni ta 'RNA jista' jittejjeb billi tiżdied il-konċentrazzjoni ta 'NTP (kull konċentrazzjoni tista' tilħaq 10mM), filwaqt li l-konċentrazzjoni ta 'Mg2 + jeħtieġ li tiżdied b'mod xieraq.

    • It-taħlita ta' reazzjoni ta' sintesi ta' RNA għandha tiġi ppreparata f'temperatura tal-kamra, peress li d-DNA jista' jippreċipita fil-preżenza ta' 10×HH T7 Buffer f'4°C.

    •Ir-rendiment ta' traskrizzjonijiet ta' tul xieraq jonqos jekk il-mudell tad-DNA ma jkunx linearizzat għal kollox.•It-taħlita ta 'reazzjoni tista' tiġi skalata 'l fuq jew 'l isfel.• Jekk ir-rendiment tal-prodott tar-reazzjoni jitnaqqas, 20 mM DTT frisk jista 'jiġi miżjud mas-sistema ta' reazzjoni.

    • Frammenti traskritti huma inqas minn jew ugwali għal 500bp, u huwa rakkomandat li jiġi estiż il-ħin tat-traskrizzjoni għal 4-8 h.

    •Il-preċipitati huma faċli li jinstabu f'10×HH T7.

    Ikteb il-messaġġ tiegħek hawn u ibgħatilna