Sensittivi għat-temperatura UNG
UNG Sensittiv għat-Temperatura (TS-UNG) huwa miksub permezz ta' espressjoni rikombinanti f'E. coli.L-enzima tikkatalizza r-rilaxx ta' uracil ħieles minn DNA b'linja waħda jew doppja li fiha uracil u hija inattiva kontra l-RNA.Meta mqabbel mal-enzima UNG konvenzjonali tal-oriġini tal-ġene E. coli, l-enzima TS-UNG għandha attività ogħla f'temperaturi baxxi (20℃ ~ 37℃) u hija sensittiva għat-temperatura u faċilment inattivata (50℃), tevita d-degradazzjoni tal-amplifikazzjoni li fiha dUTP prodotti f'temperatura ambjentali mill-attività residwa li tista' tibqa' wara l-inattivazzjoni tal-enzima UNG konvenzjonali.Għalhekk, l-enzima TS-UNG mhix adattata biss għar-reazzjoni tal-prevenzjoni tal-kontaminazzjoni tal-PCR, iżda wkoll taqbel sew mal-programm ta 'amplifikazzjoni RT-PCR u tista' tintuża fir-reazzjoni ta 'prevenzjoni tal-kontaminazzjoni RT-PCR.
Applikazzjoni Rakkomandata
Amplifikazzjoni tal-Prevenzjoni tal-Kontaminazzjoni
Kundizzjoni tal-Ħażna
-20 ° C għal ħażna fit-tul, għandhom jitħalltu sew qabel l-użu, jevitaw frekwenti iffriżar-tidwib.
Buffer tal-ħażna
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabbilizzatur, 50% Glycerol.
Definizzjoni ta' Unità
L-ammont ta' enzima meħtieġ biex tiddegrada 1µg ta' DNA single-stranded li jkun fih bażijiet dU f'siegħa f'37°C huwa 1 unità ta' attività (U).
Kontroll tal-Kwalità
1.Purità elettroforetika SDS-PAGE akbar minn 98%
2.Attività ta' degradazzjoni, kontroll minn lott għal lott, stabbiltà
3.L-ebda attività nukleażi eżoġena, l-ebda kontaminazzjoni eżoġena ta 'endonuclease jew exonuclease.
Istruzzjonijiet
| Komponenti | Volum (μL) | Konċentrazzjoni finali |
| 10 × PCR Buffer (ħieles minn dNTP, Mg²+b'xejn) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (issostitwixxi dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Taħlitaa | 2 | 1× |
| Mudell | - | ＜1μg/reazzjoni |
| ddH₂O | Sa 50 | - |
Nota: a: Jekk tintuża għal qPCR/qRT-PCR, is-sonda fluworexxenti għandha tiżdied fis-sistema ta 'reazzjoni.Normalment, konċentrazzjoni ta 'primer finali ta' 0.2 μM tista 'tagħti riżultati tajbin;meta l-prestazzjoni tar-reazzjoni tkun fqira, il-konċentrazzjoni tal-primer tista 'tiġi aġġustata fil-medda ta' 0.2-1 μM.Normalment, il-konċentrazzjoni tas-sonda hija ottimizzata fil-medda ta '0.1-0.3 μM.Jistgħu jsiru esperimenti ta 'gradjent ta' konċentrazzjoni biex tinstab l-aħjar kombinazzjoni ta 'primer u sonda.
Noti
1.It-temperatura ottimali ta 'reazzjoni ta' l-enzima TS-UNG hija relattivament baxxa, u tista 'tiġi ottimizzata fil-medda ta' 20 ℃ ~ 37 ℃, id-dożaġġ ta 'enżima u l-ħin ta' reazzjoni jistgħu jiġu ottimizzati fil-medda ta '0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;u l-enzima tista 'tiġi inattivata fil-proċess ta' traskrizzjoni inversa.
2.Huwa adattat għal PCR u RT-PCR biex jipprevjeni l-kontaminazzjoni.
3.Evita friża-tidwib frekwenti, u tesponix għal varjazzjonijiet kbar fit-temperatura.
4.Ġeni differenti li għandhom jiġu amplifikati għandhom effiċjenza ta 'utilizzazzjoni differenti ta' dUTP u sensittività għall-enzima UNG, għalhekk, jekk l-użu tas-sistema UNG iwassal għal tnaqqis fis-sensittività ta 'skoperta, is-sistema ta' reazzjoni għandha tiġi aġġustata u ottimizzata, jekk għandek bżonn appoġġ tekniku, jekk jogħġbok ikkuntattja kumpanija tagħna.
