2×PCR Master Mix (mingħajr Żebgħa)
PCR Master Mix hija tip ta 'soluzzjoni PCR konvenzjonali mħallta minn qabel li hija lesta biex tintuża, inkluż Taq DNA Polymerase, dNTP taħlita MgCl2 u buffer ottimizzat.Matul ir-reazzjoni, il-primer u l-mudell biss jistgħu jiġu miżjuda għall-amplifikazzjoni, li tissimplifika ħafna l-passi tal-operazzjoni tal-esperiment.Dan il-prodott fih stabilizzaturi eċċellenti u jista 'jinħażen għal 3 xhur f'4℃.Il-prodott tal-PCR għandu protrużjoni ta '3′-dA u jista' jiġi kklonat faċilment f'vettur T.
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Il-prodott għandu jinħażen f'-25 ℃ ~ -15 ℃ għal sentejn.
Speċifikazzjonijiet
| Fedeltà (vs.Taq) | 1× |
| Bidu sħun | No |
| Sporġenza | 3′-A |
| Polimerażi | Taq DNA Polymerase |
| Format ta' Reazzjoni | SuperMix jew Master Mix |
| Veloċità ta' Reazzjoni | Standard |
| Tip ta' Prodott | Taħlita Master PCR (2×) |
Istruzzjonijiet
1.Sistema ta' Reazzjoni
| Komponenti | Daqs (μL) |
| Mudell tad-DNA | Adattat |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| Taħlita Master PCR | 25 |
| ddH2O | Sa 50 |
2.Protokoll ta' amplifikazzjoni
| Passi taċ-ċiklu | Temperatura (°C) | Ħin | Ċikli |
| Denaturazzjoni minn qabel | 94 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturazzjoni | 94 ℃ | 30 sek | 35 |
| Ittemprar | 50-60 ℃ | 30 sek | |
| Estensjoni | 72 ℃ | 30-60sec/kb | |
| Estensjoni Finali | 72 ℃ | 10 minuti | 1 |
Noti:
1) Użu tal-mudell: 50-200 ng DNA ġenomika;0.1- 10 ng DNA plasmid.
2) Mg2+konċentrazzjoni: Dan il-prodott fih 3 mM ta 'MgCl2 adattat għall-biċċa l-kbira tar-reazzjonijiet PCR.
3) Temperatura ta 'l-ittemprar: Jekk jogħġbok irreferi għall-valur Tm teoretiku ta' Primers.It-temperatura ta 'l-ittemprar tista' tiġi ssettjata għal 2-5 ℃ inqas mill-valur teoretiku tal-primer.
4) Ħin ta 'estensjoni: Għal identifikazzjoni molekulari, 30 sek/kb huwa rakkomandat.Għall-klonazzjoni tal-ġeni, 60sec/kb huwa rakkomandat.
Noti
1.Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowtijiet tal-laboratorju u ingwanti li jintremew għall-operazzjoni.
2.Għal użu ta 'riċerka biss!
