DNase I (Rnase Ħieles) (5u/ul)
Cat Nru: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) huwa endodeoxyribonuclease li jista 'jiddiġerixxi DNA b'linja waħda jew doppja.Jirrikonoxxi u jaqsam ir-rabtiet tal-fosfodiesteri biex jipproduċi monodeossinukleotidi jew oligodeossinukleotidi b'linja waħda jew doppja bi gruppi ta' fosfat fit-terminal 5' u hydroxyl fit-terminal 3'.L-attività tad-DNase I tiddependi fuq Ca2+u jistgħu jiġu attivati minn joni tal-metall divalenti bħal Mn2+u Zn2+.5 mM Ca2+jipproteġi l-enzima mill-idroliżi.Fil-preżenza ta’ Mg2+, l-enzima tista' tirrikonoxxi u taqsam b'mod każwali kwalunkwe sit fuq kwalunkwe linja tad-DNA.Fil-preżenza ta’ Mn2+, il-fergħat doppji tad-DNA jistgħu simultanjament jiġu rikonoxxuti u maqsuma fi kważi l-istess sit biex jiffurmaw frammenti tad-DNA tat-tarf ċatt jew frammenti tad-DNA tat-tarf li jwaħħal b'1-2 nukleotidi jisporġu 'l barra.
Komponenti
| Isem | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, mingħajr RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 mL |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mL |
Kundizzjonijiet tal-ħażna
-25℃~-15℃ għall-ħażna;Trasport taħt pakketti tas-silġ.
Istruzzjonijiet
1. Ipprepara s-soluzzjoni ta' reazzjoni fit-tubu ħieles mill-RNase skont il-proporzjonijiet elenkati hawn taħt:
| Komponent | Volum |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, mingħajr RNase (5U/μL) | 1 U għal kull µg RNA① |
| ddH2O | Sa 10μL |
Nota: ①Ikkalkula l-volum ta 'DNase I li jeħtieġ li jiġi miżjud abbażi tal-ammont ta' RNA.
2. 37 ℃ għal 15-il minuta;
3. Żid 0.5M EDTA mal-konċentrazzjoni finali ta '2.5mM ~ 5mM, u saħħan f'65 ℃ għal 10 minuti biex twaqqaf ir-reazzjoni.Il-kampjun jista 'jintuża direttament għar-reazzjoni li jmiss bħal traskrizzjoni inversaesperiment.
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta' enzima li tiddegrada kompletament 1µg ta' pBR322DNA f'10 minuti f'37℃.
Kontroll tal-Kwalità
RNase:5U ta' DNase I b'1.6µg MS2 RNA għal 4 sigħat f'37℃ ma jagħti l-ebda degradazzjoni peress lideterminat mill-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose.
Noti
1. Jekk jogħġbok ipprepara 0.5MEDTA minnek innifsek.
2. Uża 1U DNase I għal kull µg ta' RNA.Madankollu, jekk l-RNA huwa inqas minn 1µg, jekk jogħġbok uża 1U DNase I.
3. Jekk jogħġbok poġġi l-enzima fuq is-silġ waqt it-tħaddim.
