Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat Nru: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG huwa reaġent speċjalizzat iddisinjat għal reazzjonijiet kwalitattivi u kwantitattivi tal-PCR Real Time bl-użu ta 'skoperta bbażata fuq sonda, żviluppata speċifikament għal proċessi ta' lajofilizzazzjoni.Fiha enzima hot-start ġdida Hotstart Taq plus (DG), li għandha l-attività ta 'enżima Taq tagħha ssiġillata f'temperatura tal-kamra, li effettivament jinibixxi amplifikazzjoni mhux speċifika kkawżata minn ttemprar mhux speċifiku tal-primer jew formazzjoni ta' primer dimer taħt kundizzjonijiet ta 'temperatura baxxa, u b'hekk ittejjeb l-ispeċifiċità tar-reazzjoni ta 'amplifikazzjoni.Dan ir-reaġent juża buffer speċifiku qPCR ottimizzat u sistema ta 'kontra l-kontaminazzjoni UNG/dUTP biex jikseb startjar sħun rapidu, itejjeb ħafna l-effiċjenza u s-sensittività tar-reazzjonijiet qPCR.Jista 'jikseb kurvi standard tajbin f'firxa wiesgħa ta' żoni ta 'kwantifikazzjoni u jwettaq b'mod preċiż il-kwantifikazzjoni, jipprevjeni b'mod effettiv amplifikazzjoni pożittiva falza kkawżata minn prodotti tal-PCR residwu jew kontaminazzjoni tal-ajrusol.Dan ir-reaġent huwa kompatibbli mal-biċċa l-kbira tal-istrumenti PCR kwantitattivi fluworexxenti minn manifatturi bħal Applied Biosystems, Eppendorf, Bio- Rad u Roche eċċ., u juri stabbiltà tajba f'forma lajofilizzata.
Kompożizzjoni tar-reaġent
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+b'xejn) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (mhux obbligatorju)
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Ħażna fit-tul f'-20℃;jista 'jinħażen f'4℃ sa 3 xhur.Ħallat sew qabel l-użu uevita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti.
Protokoll taċ-ċikliżmu
| Proċedura | Temp. | Ħin | Ċiklu |
| Diġestjoni | 50℃ | 2 min | 1 |
| Attivazzjoni tal-polimerażi | 95℃ | 1 ~ 5 min | 1 |
| Denaturazzjoni | 95℃ | 10 ~ 20 s | 40-50 |
| Ittemprar u Estensjoni | 56 ~ 64℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Reazzjoni Likwida SyStem Preparazzjoni
|
Kompożizzjoni |
25µL Volum |
50µL Volum |
Konċentrazzjoni Finali |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+b'xejn) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25 × Taħlita tal-Primer-Probe2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Mudell tad-DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Sa 25µL | Sa 50µL | —— |
1. Konċentrazzjoni finali ta '0.2μM għal primers normalment tagħti riżultati tajbin;meta l-prestazzjoni tar-reazzjoni tkun fqira, aġġusta l-konċentrazzjoni tal-primer fil-medda ta '0.2-1μM kif meħtieġ.Il-konċentrazzjoni tas-sonda hija tipikament ottimizzata fil-medda ta '0.1-0.3μM permezz ta' esperimenti ta 'gradjent biex issib kombinazzjonijiet ottimali.
2. In-numru tal-kopja tal-ġeni fil-mira li jinsabu f'tipi differenti ta 'mudelli jvarja;jekk meħtieġ, dilwizzjoni tal-gradjent tista 'titwettaq biex jiġi ddeterminat l-aħjar ammont ta' żieda tal-mudell.
3. Din is-sistema tista 'tiġi lajofilizzata;meta l-klijenti jużaw din is-sistema mingħajr rekwiżiti ta 'tnixxif tal-iffriżar, 4×lyoprotectant jista' jiġi miżjud b'mod selettiv; jekk ikun hemm bżonn ta 'prodotti mnixxfa bil-friża, waqt il-validazzjoni tal-prestazzjoni tal-prodott tal-istadju tar-reaġenti likwidi, għandu jżid 4×lyoprotectant biex jiżgura konsistenza mal-komponenti tas-sistema lajofilizzata u l-effetti.
Meta tintuża s-sistemad għat-tnixxif bil-friża, ipprepara l- sistema as li ġej:
| Kompożizzjoni | 25µL Sistema ta' Reazzjoni |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+b'xejn) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25 × Taħlita tal-Primer-Probe | 1µL |
| ddH2O | Għal 18 ~ 20µL |
* Jekk huma meħtieġa sistemi oħra għat-tnixxif bil-friża, jekk jogħġbok ikkonsulta separatament.
Proċess ta' Lijofilizzazzjoniss
| Proċedura | Temp. | Ħin | Kundizzjoni | Pressjoni |
| Iffriżar minn qabel | 4℃ | 30 min | Żomm |
1 atm |
| -50℃ | 60 min | Tkessiħ | ||
| -50℃ | 180 min | Żomm | ||
| Tnixxif Primarju | -30℃ | 60 min | Tisħin |
Vakwu Aħħari |
| -30℃ | 70 min | Żomm | ||
| Tnixxif Sekondarju | 25℃ | 60 min | Tisħin |
Vakwu Aħħari |
| 25℃ | 300 min | Żomm |
2. Il-proċess ta 'lijofilizzazzjoni ta' hawn fuq huwa għal referenza biss.Tipi differenti ta’ prodotti u freeze-drivers differenti għandhom parametri differenti, għalhekk jistgħu jsiru aġġustamenti skontkundizzjonijiet waqt l-użu.
3. Proċessi differenti ta 'lyophilization jistgħu jkunu adattati għal daqsijiet differenti ta' lott ta 'lyophilizedprodotti, għalhekk trid titwettaq validazzjoni tal-ittestjar suffiċjenti meta tintuża għal produzzjoni fuq skala kbira.
Istruzzjoni għall-użu tal-lyophilized trab
1. Iċċentrifuga fil-qosor it-trab lajofilizzat;
2. Żid il-mudell tal-aċidu nuklejku mat-trab lajofilizzat u żid ilma sa 25µL;
3. Ħallat sew biċ-ċentrifugazzjoni u ħaddem il-magna.
Kontroll tal-Kwalità:
1. Ittestjar funzjonali: sensittività, speċifiċità, riproduċibbiltà tal-qPCR.
2. L-ebda attività nukleażi eżoġena, l-ebda kontaminazzjoni eżoġena ta 'endo/exonuclease.
Informazzjoni Teknika:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG juża enzima hot-start ġdida li tippermetti hot-start rapidu fi żmien 1 ~ 5 minuti;permezz ta 'formulazzjoni buffer speċjali huwa adattat għal reazzjonijiet PCR kwantitattivi fluworexxenti multiplex.
2. Għandu speċifiċità ogħla li ttejjeb b'mod sinifikanti s-sensittività ta 'skoperta ta' limitu ta 'PCR kwantitattiv ta' fluworexxenza, tagħmel normalizzazzjoni ta 'kurvi ta' amplifikazzjoni, valur ta 'fluworexxenza tikseb titjib ovvju f'mudelli ta' konċentrazzjoni baxxa, adattati bħala reaġenti ta 'skoperta ta' PCR kwantitattivi ta 'sensittività għolja.
3. Għal primers b'temperatura ta 'ttemprar aktar baxxa jew itwal minn frammenti ta' 200bp, huwa rakkomandat metodu ta '3 stadji.
4. L-effiċjenza ta 'utilizzazzjoni ta' dUTP u s-sensittività għall-enzima UNG huma differenti għal ġeni fil-mira differenti, għalhekk jekk l-użu tas-sistema UNG iwassal għal tnaqqis fis-sensittività ta 'skoperta, is-sistema ta' reazzjoni għandha tiġi aġġustata u ottimizzata.Jekk ikun meħtieġ appoġġ tekniku jekk jogħġbok ikkuntattja lill-kumpanija tagħna.
5. Uża żoni u pipetti ddedikati qabel u wara l-amplifikazzjoni, ilbes ingwanti waqt it-tħaddim u ibdelhom spiss;tiftaħx it-tubu tar-reazzjoni wara t-tlestija tal-PCR biex timminimizza l-kontaminazzjoni tal-kampjuni mill-prodotti tal-PCR.
