DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) huwa endodeoxyribonuclease li jista 'jiddiġerixxi DNA b'linja waħda jew doppja.Jirrikonoxxi u jaqsam ir-rabtiet tal-fosfodiesteru biex jipproduċi monodeoxynucleotides jew oligodeoxynucleotides b'linja waħda jew doppja b'gruppi ta' fosfat fit-terminal 5′ u hydroxyl fit-terminal 3′.L-attività tad-DNase I tiddependi fuq Ca2+ u tista’ tiġi attivata minn joni tal-metall divalenti bħal Mn2+ u Zn2+.5mM Ca2+ jipproteġi l-enzima mill-idroliżi.Fil-preżenza ta 'Mg2+, l-enzima tista' tirrikonoxxi u taqsam b'mod każwali kwalunkwe sit fuq kwalunkwe linja tad-DNA.Fil-preżenza ta 'Mn2+, il-fergħat doppji tad-DNA jistgħu simultanjament jiġu rikonoxxuti u maqsuma fi kważi l-istess sit biex jiffurmaw frammenti tad-DNA tat-tarf ċatt jew frammenti tad-DNA tat-tarf li jwaħħal b'1-2 nukleotidi jisporġu 'l barra.
Proprjetà tal-Prodott
Bovine Pancreas DNase I kien espress f'sistema ta 'espressjoni tal-ħmira u purifikat.
Componenti
| Komponent | Volum | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, mingħajr RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10mL |
Trasport u Ħażna
1. Stabbiltà tal-Ħażna: – 15℃ ~ -25℃ għall-ħażna;
2.Stabbiltà tat-Trasport: Trasport taħt pakketti tas-silġ;
3. Forniti fi: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliċerol, pH 7.6 f'25℃.
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta' enzima li tiddegrada kompletament 1 µg ta' pBR322 DNA f'10 minuti f'37°C.
Kontroll tal-Kwalità
RNase:5U ta 'DNase I b'1.6 μg MS2 RNA għal 4 sigħat f'37 ℃ ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforesi tal-ġel agarose.
Batterjali Endotossina:LAL-test, skont l-edizzjoni tal-Farmakopea Ċiniża IV 2020, metodu tat-test tal-limitu tal-ġel, regola ġenerali (1143).Il-kontenut ta' endotossina batterjali għandu jkun ≤10 EU/mg.
Struzzjonijiet għall-Użu
1.Ipprepara s-soluzzjoni ta 'reazzjoni fit-tubu mingħajr RNase skond il-proporzjonijiet elenkati hawn taħt:
| Komponent | Volum |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, mingħajr RNase (5U/μL) | 1 U għal kull μg RNA |
| ddH2O | Sa 10 μL |
2.37 ℃ għal 15-il minuta;
3.Żid il-buffer tat-terminazzjoni biex twaqqaf ir-reazzjoni, u saħħan f'65 ℃ għal 10 minuti biex tinattiva d-DNase I. Il-kampjun jista 'jintuża direttament għall-esperiment ta' traskrizzjoni li jmiss.
Noti
1.Uża 1U DNase I għal kull μg ta 'RNA, jew 1U DNase I għal inqas minn 1μg ta' RNA.
2.EDTA għandu jiġi miżjud ma 'konċentrazzjoni finali ta' 5 mM biex jipproteġi l-RNA milli jiġi degradat waqt l-inattivazzjoni tal-enżimi.
