RT-LAMP Kolormetriku Master Mix HCB5204A
Dan il-prodott fih buffer ta' reazzjoni, Taħlita ta' RT-Enzymes (Bst DNA polymerase u reverse transcriptase reżistenti għas-sħana), Protetturi lajofilizzati u komponenti taż-żebgħa kromoġeniċi.Biex tuża, uża biss Buffer, l-enzima tar-reazzjoni u l-primer huma mħallta u miżjuda mal-mudell;iż-żieda ta 'protettant lajofilizzat tista' tkun dritta.Kien imqabbad ma 'lyophilizer u lajofilizzat, u l-primers u l-mudelli biss ġew miżjuda meta użati.Dan il-kit jipprovdi skoperta viżwali veloċi u ċara ta 'amplifikazzjoni, liema reazzjoni negattiva hija indikata bl-aħmar u reazzjoni pożittiva hija indikata b'bidla għal isfar.
Komponent
| Komponent | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Buffer ta' Amplifikazzjoni medjat minn loop (b'żebgħa) | 0.96 mL | 4.80 mL × 2 | 9.60 mL × 10 |
| Ħallat ta' RT-Enżimi | 270 μL | 2.70 mL | 2.70 mL × 10 |
| Protettant lajofilizzat | 0.96 mL × 2 | 9.60 mL × 2 | 9.60 mL × 20 |
Applikazzjonijiet
Għal amplifikazzjoni iżotermika tad-DNA jew RNA.
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Trasportat bis-silġ niexef, maħżun f'-25 ~ -15 ℃.Evita l-iffriżar u t-tidwib frekwenti, il-prodott huwa validu għal 12-il xahar.
Protokoll
1.Ħoll il-buffer tar-reazzjoni li se jintuża f'temperatura tal-kamra.Vortex fil-qosor jew aqleb it-tubi diversi drabi biex tħallat sewwa, imbagħad ċentrifuga biex tiġbor il-likwidu fil-qiegħ tat-tubu.
2.Preparazzjoni ta' sistema ta' reazzjoni.Dan ir-reaġent jista 'jiġi ppreparat f'żewġ sistemi ta' reazzjoni, taħlita ta 'reazzjoni likwida u taħlita ta' sistema lajofilizzata.
1) Ipprepara taħlita ta 'reazzjoni likwida
| Komponent | Volum |
| Buffer ta' Amplifikazzjoni medjat minn loop (b'żebgħa) | 10 μL |
| Ħallat ta' RT-Enżimi | 2.8 μL |
| 10 × Primer Taħlitaa | 5 μL |
| Mudelli DNA/RNA b | × μL |
| Ilma mingħajr nukleażi | Sa 50 μL |
2) Taħlita tas-sistema tal-lijofilizzazzjoni
① Ipprepara taħlita lajofilizzata
| Komponent | Volum |
| Buffer ta' Amplifikazzjoni medjat minn loop (b'żebgħa) | 10 μL |
| Protettant lajofilizzat | 20 μL |
| Ħallat ta' RT-Enżimi | 2.8 μL |
| Ilma mingħajr nukleażi | Sa 50 μL |
② Lijofilizzazzjoni: It-Taħlita ppreparata ġiet lajofilizzata f'sistema ta '50μL
③ Ipprepara taħlita ta 'reazzjoni
| Komponent | Volum |
| Taħlita lajofilizzata | biċċa 1 |
| 10 × Primer Taħlitaa | 5 μL |
| Mudelli DNA/RNA b | × μL |
| Ilma mingħajr nukleażi | Sa 50 μL |
Noti:
1) a.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (solubbli fl-ilma) huwa rrakkomandat għall-aċidu nuklejku templ.
1.Inkuba f'65 ° C għal 30-45 minuta, li tista 'tiġi estiża b'mod xieraq skond il-bidla fil-kulur Ħin ta' reazzjoni.
2.Skont l-għajn, isfar kien pożittiv u aħmar kien negattiv.
Noti
1.Il-melħ jista 'jidher fil-qiegħ tat-tubu buffer, vortex fil-qosor jew aqleb it-tubi diversi drabi biex jitħallat sewwa f'temperatura tal-kamra.
2.It-temperatura tar-reazzjoni tista 'tiġi ottimizzata bejn 62 ℃ u 68 ℃ skont il-kundizzjoni tal-primers.
3.Ir-reaġenti ppakkjati m'għandhomx ikunu esposti għall-arja għal żmien twil.
4.Ir-reazzjoni ta 'skulurazzjoni ħamra u safra tiddependi fuq il-bidla fil-pH tas-sistema ta' reazzjoni, jekk jogħġbok tużax is-soluzzjoni ta 'ħażna ta' aċidu nuklejku li fiha Tris, rakkomandat li tuża ddH2O aċidu nuklejku maħżun;
5.L-esperiment għandu jkun standardizzat, inkluża l-preparazzjoni tas-sistema ta 'reazzjoni, lijofilizzazzjoni, u proċessar ta' kampjuni u proċess ta 'żieda ta' kampjuni;
6.Biex tiġi evitata l-kontaminazzjoni, huwa rrakkomandat li tħejji s-sistema ta 'reazzjoni f'bank ultra nadif, f'templates oħra Żid mal-kappa tad-dħaħen tal-kamra biex tevita interferenza pożittiva falza.
