Kit ta' Estrazzjoni tad-DNA/RNA virali
Dan il-kit huwa adattat għall-estrazzjoni rapida ta 'DNA/RNA virali ta' purità għolja minn kampjuni bħal tampuni nasofarinġi, tampuni ambjentali, supernatanti tal-kultura taċ-ċelluli, u supernatanti omoġenati tat-tessuti.Il-kit huwa bbażat fuq teknoloġija ta 'purifikazzjoni tal-membrana tas-silika li telimina l-ħtieġa għall-użu ta' solventi organiċi tal-fenol/kloroform jew preċipitazzjoni tal-alkoħol li tieħu ħafna ħin biex tiġi estratta DNA virali/RNA ta 'kwalità għolja.L-aċidi nuklejċi miksuba huma ħielsa minn impuritajiet u lesti għall-użu f'esperimenti downstream bħal traskrizzjoni inversa, PCR, RT-PCR, PCR f'ħin reali, sekwenzar tal-ġenerazzjoni li jmiss (NGS), u Northern blot.
Kundizzjonijiet tal-ħażna
Aħżen f'temperatura ta '15 ~ 25 ℃, u ttrasporta f'temperatura tal-kamra
Komponenti
| Komponenti | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| ddH2 O mingħajr RNase | 6 ml |
| Kolonni FastPure RNA | 100 |
| Tubi tal-Ġbir (2ml) | 100 |
| Tubi tal-Ġbir mingħajr RNase (1 .5ml) | 100 |
Buffer VL:Ipprovdi ambjent għall-liżi u l-irbit.
Buffer RW:Neħħi proteini residwi u impuritajiet oħra.
ddH2O mingħajr RNase:Elute DNA/RNA mill-membrana fil-kolonna spin.
Kolonni FastPure RNA:Speċifikament jassorbi DNA/RNA.
Tubi tal-Ġbir 2 ml:Iġbor il-filtrat.
Tubi tal-Ġbir mingħajr RNase 1.5 ml:Iġbor DNA/RNA.
Applikazzjonijiet
Tampuni nasofarinġi, tampuni ambjentali, supernatanti tal-kultura taċ-ċelluli, u supernatanti omoġenati tat-tessuti.
Mater ippreparat waħduials
Truf tal-pipetti mingħajr RNase, tubi ċentrifugi mingħajr RNase ta '1.5 ml, ċentrifuga, vortex mixer, u pipetti.
Proċess ta 'Esperiment
Wettaq il-passi kollha li ġejjin f'kabinett tal-bijosigurtà.
1. Żid 200 μl tal-kampjun ma' tubu ċentrifugu ħieles minn RNase (impatti b'PBS jew 0.9% NaCl f'każ ta' kampjun insuffiċjenti), żid 500 μl ta' Buffer VL, ħawwad sew billi ħawwad għal 15 – 30 sek, u ċentrifuga. fil-qosor biex tiġbor it-taħlita fil-qiegħ tat-tubu.
2. Poġġi Kolonni FastPure RNA f'Tubi tal-Ġbir 2 ml.Ittrasferixxi t-taħlita mill-Pass 1 għal FastPure RNA Columns, ċentrifuga fi 12,000 rpm (13,400 × g) għal 1 min, u armi l-filtrat.
3. Żid 600 μl ta' Buffer RW ma' FastPure RNA Columns, ċentrifuga fi 12,000 rpm (13,400 × g) għal 30 sek, u armi l-filtrat.
4. Irrepeti l-pass 3.
5. Iċċentrifuga l-kolonna vojta fi 12,000 rpm (13,400 × g) għal 2 min.
6. Ittrasferixxi bir-reqqa l-Kolonni FastPure RNA f'Tubi ta' Ġbir 1.5 ml ġodda mingħajr RNase (provduti fil-kit), u żid 30 – 50 μl ta' ddH2O mingħajr RNase fiċ-ċentru tal-membrana mingħajr ma tmiss il-kolonna.Ħallih joqgħod f'temperatura tal-kamra għal 1 min u ċentrifuga fi 12,000 rpm (13,400 × g) għal 1 min.
7. Armi l-Kolonni FastPure RNA.Id-DNA/RNA jistgħu jintużaw direttament għal analiżi sussegwenti, jew maħżuna fi -30 ~ -15 ° C għal perjodu qasir jew -85 ~ -65 ° C għal perjodu itwal.
Noti
Għall-użu tar-riċerka biss.Mhux għall-użu fi proċeduri dijanjostiċi.
1. Ekwilibrat il-kampjuni għat-temperatura tal-kamra bil-quddiem.
2. Il-viruses huma infettivi ħafna.Jekk jogħġbok kun żgur li jittieħdu l-prekawzjonijiet kollha meħtieġa ta 'sigurtà qabel l-esperiment.
3. Evita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti tal-kampjun, peress li dan jista' jwassal għal degradazzjoni jew tnaqqis fil-produzzjoni tad-DNA/RNA virali estratt.
4. Tagħmir ippreparat waħdu jinkludi ponot tal-pipetti mingħajr RNase, tubi ċentrifugi mingħajr RNase ta '1.5 ml, ċentrifuga, mixer vortex, u pipetti.
5. Meta tuża l-kit, ilbes kisja tal-laboratorju, ingwanti tal-lattiċe li jintremew, u maskra li tintrema u uża konsumabbli mingħajr RNase biex timminimizza r-riskju ta 'kontaminazzjoni ta' RNase.
6. Wettaq il-passi kollha f'temperatura ambjentali sakemm ma jkunx speċifikat mod ieħor.
Mekkaniżmu u Fluss tax-Xogħol
