Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (Ħieles gliċerol)
Bst DNA polymerase V2 hija derivata minn Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, li għandha attività ta 'DNA polymerase 5′→3′ u attività qawwija ta' sostituzzjoni tal-katina, iżda l-ebda attività exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 huwa idealment adattat għal strand-splacement, amplifikazzjoni iżotermika LAMP (amplifikazzjoni isotermika medjata minn Loop) u sekwenzar rapidu.Bst DNA polymerase V2 hija verżjoni hot-start ibbażata fuq Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) miksuba permezz ta 'teknoloġija ta' modifika riversibbli, li tista 'tinibixxi l-attività tad-DNA polimerażi f'temperatura tal-kamra, sabiex is-sistema ta' reazzjoni tista 'titħaddem u fformulata f'temperatura ambjentali biex tevita li ma jkunx hemm. -amplifikazzjoni speċifika u ttejjeb l-effiċjenza tar-reazzjoni, u din il-verżjoni tista 'tiġi lajofilizzata.Barra minn hekk, l-attività tagħha hija rilaxxata f'temperaturi għoljin, għalhekk m'hemmx bżonn ta 'pass ta' attivazzjoni separat.
Komponenti
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polymerase V2 (Mingħajr gliċerol) (8U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5 mL | 2 × 1.5 mL | 2 × 10 mL |
Applikazzjonijiet
1.Amplifikazzjoni iżotermika LAMP
2.Reazzjoni ta' spostament wieħed tal-fergħa tad-DNA
3.Sekwenzar tal-ġeni GC għoli
4.Sekwenzar tad-DNA tal-livell nanogramma.
Kundizzjoni tal-Ħażna
Trasport taħt 0°C u jinħażen f'-25°C~-15°C.
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta 'enżima li tinkorpora 25 nmol ta' dNTP f'materjal li ma jinħallx fl-aċidu fi 30 minuta f'65°C.
Kontroll tal-Kwalità
1.Assaġġ tal-Purità tal-Proteina (SDS-PAGE):Il-purità ta 'Bst DNA polymerase V2 hija ≥99% determinata mill-analiżi SDS-PAGE bl-użu ta' skoperta Coomassie Blue.
2.EndonukleażiAttività:L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50 μL li jkun fiha minimu ta' 8 U ta' Bst DNA polymerase V2 b'1 μg λDNA għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma tirriżulta f'ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.
3.Attività Exonuclease:L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50 μL li fiha minimu ta' 8 U ta' Bst DNA polymerase V2 b'1 μg λ -Hind Ⅲ diġest DNA għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.
4.Attività Nickase:L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50 μL li jkun fiha minimu ta' 8 U ta' Bst DNA polymerase V2 b'1 μg pBR322 DNA għal 16-il siegħa f'37°C ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.
5.Attività RNase:Inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50 μL li jkun fiha minimu ta' 8 U ta' Bst DNA polymerase V2 b'1.6 μg MS2 RNA għal 16-il siegħa f'37°C ma tirriżulta fl-ebda degradazzjoni li tista' tinkixef kif determinat.
6.E. coliDNA:120 U ta' Bst DNA polymerase V2 jiġi skrinjat għall-preżenza ta' E. coli DNA ġenomika bl-użu ta' TaqMan qPCR b'primers speċifiċi għall-locus rRNA E. coli 16S.Il-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika ta' E. coli hija ≤1 Kopja.
BOZZA Reazzjoni
| Komponenti | 25μL |
| 10 × HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTPs (10mM kull wieħed) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Aħdar (25×)a | 1.0 μL |
| Primer taħlitab | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Mingħajr gliċerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| Mudell | × μL |
| ddH₂O | Sa 25 μL |
Noti:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Skont il-ħtiġijiet sperimentali, żebgħa oħra jistgħu jintużaw bħala sostituti;
2) b.Taħlita tal-primer: miksuba billi tħallat 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB u volumi oħra.
Reazzjoni u Kundizzjoni
1 × HC Bst V2 Buffer, it-temperatura ta 'inkubazzjoni hija bejn 60°C u 65°C.
Inattivazzjoni tas-Sħana
80°C, 20mins
