CHO HCP ELISA Kit
F'dan l-assaġġ jintuża metodu ELISA immunosorbent f'pass wieħed.Kampjuni li fihom CHOK1 HCP jirreaġixxu fl-istess ħin ma 'antikorp anti-CHOK1 tal-mogħoż tikkettat HRP u antikorp anti-CHOK1 miksi fuq il-pjanċa ELISA, u fl-aħħar jiffurmaw kumpless sandwich ta' antikorp tikkettat b'antikorp ta 'fażi solida-HCP.Antiġen-antikorp mhux marbut jista' jitneħħa billi taħsel il-pjanċa ELISA.Is-sottostrat TMB huwa miżjud mal-bir għal reazzjoni suffiċjenti.L-iżvilupp tal-kulur jitwaqqaf wara li żżid is-soluzzjoni ta 'waqfien, u l-OD jew il-valur ta' assorbiment tas-soluzzjoni ta 'reazzjoni f'450/650nm jinqara b'qarrej tal-mikroplate.Il-valur OD jew il-valur tal-assorbiment huwa proporzjonali għall-kontenut HCP fis-soluzzjoni.Minn dan, il-konċentrazzjoni HCP fis-soluzzjoni tista 'tiġi kkalkulata skont il-kurva standard.
Applikazzjoni
Dan il-kit jintuża biex jikxef b'mod kwantitattiv il-kontenut tar-residwi tal-proteina taċ-ċelluli ospitanti CHOK1 fil-kampjuni.
Componenti
| S/N | Komponent | Konċentrazzjoni | Kundizzjonijiet tal-Ħażna |
| 1 | Standard CHOK1 HCP | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, ipproteġi mid-dawl |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, ipproteġi mid-dawl |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Waqqaf is-soluzzjoni | NA | RT |
| 6 | Sealers tal-mikroplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Pjanċi ta 'kisi minn qabel ta' adsorbiment għoli | NA | 2-8℃ |
Tagħmir Meħtieġ
| Konsumabbli / Tagħmir | Manifattura | Katalgu |
| Qarrej tal-mikroplate | Apparat Molekulari | Spectra Max M5, M5e, jew ekwivalenti |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, jew ekwivalenti |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Diġitali, jew ekwivalenti |
Ħażna u stabbiltà
1.Trasport f'-25 ~ -15 °C.
2.Il-kundizzjonijiet tal-ħażna huma kif muri fit-Tabella 1;komponenti 1-2 huma maħżuna ≤–20°C,5-6 huma maħżuna RT,3、4、7、8 huma maħżuna f'2-8℃;il-perjodu ta' validità huwa ta' 12-il xahar.
Parametri tal-prodott
1.Sensittività: 1ng/mL
2.Firxa ta 'skoperta: 3- 100ng/mL
3.Preċiżjoni: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.Kopertura tal-HCP: > 80%
5.Speċifiċità: Dan il-kit huwa universali peress li jirreaġixxi speċifikament ma 'CHOK1 HCP indipendenti mill-proċess ta' purifikazzjoni.
Preparazzjoni tar-reaġent
1.PBST 0.05%
Ħu 15 ml ta '20 × PBST 0.05%, dilwit f'ddH2O, u magħmula sa 300 ml.
2.1.0% BSA
Ħu 1g ta 'BSA mill-flixkun u ħallat f'100 ml ta' PBST 0.05%, ħawwad sew sakemm tinħall kompletament, u aħżen f'2-8°C.Il-buffer tad-dilwizzjoni ppreparat huwa validu għal 7 ijiem.Huwa rakkomandat li tipprepara kif meħtieġ.
3.Soluzzjoni ta 'skoperta 2μg/mL
Ħu 48μL ta '0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP u ħallat fi 11,952μL ta' 1% BSA biex tikseb konċentrazzjoni finali ta 'soluzzjoni ta' skoperta 2μg/mL.
4.QC u Preparazzjoni ta' Standards CHOK1 HCP
| Tubu Nru. | Oriġinali | Konċentrazzjoni | Volum | 1% BSA | Volum totali | Finali |
| A | Standard | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabella: Preparazzjoni ta 'QC u Standards
Proċedura ta' Assaġġ
1.Ipprepara r-reaġenti kif indikat fi “Preparazzjoni tar-Reaġent” hawn fuq.
2.Ħu 50μL ta 'standards, kampjuni u QCs (irreferi għat-Tabella 3) f'kull bir, imbagħad żid 100μL ta' soluzzjoni ta 'Sejbien (2μg/mL);Għatti l-pjanċa b'sealer, u poġġi l-pjanċa ELISA fuq it-thermomixer.Inkuba f'500rpm, 25±3℃ għal sagħtejn.
3.Aqleb il-mikroplate fis-sink u armi s-soluzzjoni tal-kisi.Pipetta 300μL ta' PBST 0.05% f'kull bir biex taħsel il-pjanċa ELISA u armi s-soluzzjoni, u rrepeti l-ħasil 3 darbiet.Aqleb il-pjanċa fuq xugaman tal-karti nadif u nixxef.
4.Żid 100μL ta 'substrat TMB (ara Tabella 1) ma' kull bir, issiġilla l-pjanċa ELISA, u inkuba fid-dlam f'25±3℃ għal 15-il minuta.
5.Pipetta 100μL ta' soluzzjoni ta' waqfien f'kull bir.
6.Kejjel l-assorbenza f'wavelength ta '450/650nm b'microplate reader.
7.Analizza data permezz ta' SoftMax jew softwer ekwivalenti.Plott kurva standard billi tuża mudell ta 'regressjoni loġistika b'erba' parametri.
Eżempju ta' Kurva Standard
NOTA: Jekk il-konċentrazzjoni ta 'HCP fil-kampjun taqbeż il-limitu ta' fuq tal-kurva standard, jeħtieġ li tiġi dilwita sew bil-buffer tad-dilwizzjoni qabel l-ittestjar.
NOTI
Is-soluzzjoni ta 'waqfien hija aċidu sulfuriku 2M, jekk jogħġbok immaniġġja b'attenzjoni biex tevita t-titjir!
