Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (Modifikazzjoni ta 'Antikorp) hija DNA polimerażi termostabbli hot-start minn Thermus aquaticus YT-1, li tippossjedi attività ta' polimerażi 5'→3' u attività endonukleażi flap 5'.Il-hot-start Taq DNA polymerase hija Taq DNA polymerase li modifikata minn antikorpi Taq termolabbli.Il-modifika tal-antikorpi żiedet l-ispeċifiċità, is-sensittività u r-rendiment tal-PCR.
Komponenti
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4 × 1 mL | 4 × 10 mL | 4 × 50 mL | 5 × 400 mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Antikorp modifikat) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10 × 5 mL |
Applikazzjonijiet
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 f'25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 u 50% Glycerol.
Kundizzjoni tal-Ħażna
Trasport taħt 0°C u jinħażen f'-25°C~-15°C.
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta 'enżima li tinkorpora 15 nmol ta' dNTP f'materjal li ma jinħallx fl-aċidu fi 30 minuta f'75°C.
Kontroll tal-Kwalità
1.EndAttività onukleażi:L-inkubazzjoni ta '20 U ta' enzima b'4 μg pUC19 DNA għal 4 sigħat f'37 ℃ ma rriżultat fl-ebda degradazzjoni tad-DNA li tinkixef kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel.
2.5 kb Lambda PCR:25 Ċiklu ta 'amplifikazzjoni PCR ta' 5 ng Lambda DNA b'1.25 unitajiet ta 'Taq DNA Polymerase fil-preżenza ta' 200 µM dNTPs u 0.2 µM primers jirriżultaw fil-prodott mistenni ta '5 kb.
3.Attività Exonuclease:L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 50 µl li jkun fiha minimu ta' 12.5 U ta' Taq DNA Polymerase b'10 nmol 5´-FAM oligonucleotide għal 30 minuta f'37℃ ma tagħti l-ebda degradazzjoni li tinkixef.
4.Attività RNase:L-inkubazzjoni ta' reazzjoni ta' 10 µL li fiha 20 U ta' enzima ma' 1μg ta' traskrizzjonijiet RNA għal sagħtejn f'37°C ma rriżultat f'ebda degradazzjoni li tinkixef tal-RNA kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel.
5.Inattivazzjoni tas-Sħana:Nru.
Sistema ta' Reazzjoni
| Komponenti | Volum |
| Mudell tad-DNAa | fakultattiv |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| Ħallat dNTP (10mM kull wieħed) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Ilma mingħajr nukleażi | Sa 25 μL |
Noti:
1) a.
| DNA | Ammont |
| Ġenomika | 1 ng-1 μg |
| Plasmid jew Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.L-aħjar konċentrazzjoni ta' Taq DNA Polymerase tista' tvarja minn 5-50 unità/mL (0.1-0.5 unitajiet/reazzjoni ta' 25 µL) f'applikazzjonijiet speċjalizzati.
Protokoll ta 'ċikliżmu termali
PCR
| Pass | Temperatura(°C) | Ħin | Ċikli |
| Denaturazzjoni inizjalia | 95 ℃ | 1-3 minuti | - |
| Denaturazzjoni | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Ċikli |
| Ittemprarb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Estensjoni | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Estensjoni Finali | 68 ℃ | 5mins | - |
Noti:
1) Denaturazzjoni inizjali ta 'minuta f'95 °C hija biżżejjed għall-biċċa l-kbira tal-amplifikazzjonijiet.Għal mudelli diffiċli, denaturazzjoni itwal ta '2-3mins f'95°C hija rakkomandata.Bil-kolonja PCR, hija rakkomandata denaturazzjoni inizjali ta' 5 minuti f'95°C.
2) Il-pass ta 'l-ittemprar huwa tipikament 15-60 s.It-temperatura ta 'l-ittemprar hija bbażata fuq it-Tm tal-par primer u hija tipikament 45-68 ℃.
