Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Nru tal-qattus: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) huwa kit PCR kwantitattiv multiplex ibbażat fuq RNA bħala mudell.Fil-proċess tal-esperiment, twettqu traskrizzjoni inversa u PCR kwantitattiva fl-istess tubu, li ssimplifikat l-operazzjoni sperimentali u naqqas ir-riskju ta 'kontaminazzjoni.F'dan il-kit, l-ewwel linja cDNA ġiet sintetizzata b'mod effiċjenti minn Reverse Transcriptase reżistenti għas-sħana u amplifikata b'mod kwantitattiv minn HotStart Tag DNA Polymerase.Il-kit prinċipalment fih buffer MP ottimizzat, taħlita ta 'enżimi, eċċ. Is-soluzzjoni buffer diġà fiha Mg2+u dNTP.Barra minn hekk, il-fatturi li jistgħu effettivament jinibixxu l-amplifikazzjoni tal-PCR mhux speċifika u jtejbu l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni ta 'reazzjonijiet qPCR multipli huma miżjuda, li jistgħu jiżguraw l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni u jwettqu sa reazzjoni ta' amplifikazzjoni multipla.Is-sistema dUTP/UDG ġiet miżjuda biex tipprevjeni b'mod effettiv ir-riskju ta 'kontaminazzjoni bl-ajrusol.
Komponenti
1. Buffer
2. Taħlita ta 'enżimi
Speċifikazzjoni
| Bidu sħun | Mibnija fil-bidu sħun |
| Metodu ta 'skoperta | Sejbien tal-primer-sonda |
| Metodu PCR | Pass wieħed RT-qPCR |
| Polimerażi | Taq DNA polymerase |
| Tip ta' kampjun | DNA |
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Il-prodott jintbagħat bis-silġ niexef u jista 'jinħażen f'-25 ~ -15 ℃ għal sena.Għandu jiġi evitat frekwentiiffriżar-tidwib.Huwa rakkomandat li tiffranka separatament.
Istruzzjonijiet
1.Reazzjoni Sistema
| Komponenti | Volum (μL) | Konċentrazzjoni Finali |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Taħlita ta' Enżimi | 1 | - |
| Taħlita Primer/Probe (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Mudell RNA | 1-10 | - |
| RNase Ħieles H2O | sa 25 | - |
Noti:
Kun żgur li tħallat sew qabel l-użu, evita bżieżaq eċċessivi kkawżati minn vibrazzjoni vjolenti.
a.Primer konċentrazzjoni: Primer taħlita inkluż multiplex primer, skond is-sitwazzjoni ottimali primer konċentrazzjoni forsi bejn 0.l u 1.0μM.
b.Konċentrazzjoni tas-sonda: Taħlita tas-sonda inkluż grupp fluworexxenti tad-differenza tat-tikkettar tas-sonda multiplex, skont is-sitwazzjoni konċentrazzjoni ottimali tas-sonda forsi bejn 0.05 u 0.5μM.
c.Dilwizzjoni tal-mudell: qPCR huwa sensittiv ħafna u huwa rakkomandat li l-mudell jiġi dilwit.Il-valur Ct tal-kontroll huwa adattat bejn 20 u 35.
d.Preparazzjoni tas-sistema: Jekk jogħġbok ipprepara fit-tabella tax-xogħol ultra nadifa, u pipettor u tubu ta 'reazzjoni mingħajr residwu ta' nuclease;huwa rakkomandat li tuża r-ras tal-pistola b'element tal-filtru.Evita l-kontaminazzjoni inkroċjata u l-kontaminazzjoni tal-ajrusol.
2. Ċikliżmu ottimizzatProtokoll
| Ċiklu pass | Temp. | Ħin | Ċikli |
| Traskrizzjoni inversa | 50℃a | 20 minuta | 1 |
| Inizjali-denaturazzjoni | 95℃ | 5mins | 1 |
| Reazzjoni ta 'amplifikazzjoni | 95℃ | 15sec |
40-45 |
| 60℃ b | 30sec c |
Noti:
a.Traskrizzjoni inversa: It-temperatura tista 'tagħżel 42°C jew 50°C.
b.Reazzjoni ta 'amplifikazzjoni: It-temperatura hija aġġustata skond il-valur Tm tal-primers iddisinjati.
c.Akkwist tas-sinjal tal-fluworexxenza: Jekk jogħġbok issettja l-proċedura sperimentali skont ir-rekwiżiti tal-manwal tal-istrument.
Noti
Jekk jogħġbok ilbes il-PPE meħtieġ, bħal kisja tal-laboratorju u ingwanti, biex tiżgura s-saħħa u s-sigurtà tiegħek.
