Rnase Inibitur
Murine RNase inhibitor huwa inibitur rikombinanti RNase murina espress u purifikat minn E.coli.Jingħaqad ma' RNase A, B jew C fi proporzjon 1:1 permezz ta 'twaħħil mhux kovalenti, u b'hekk jinibixxi l-attività tat-tliet enzimi u jipproteġi l-RNA mid-degradazzjoni.Madankollu, Mhuwiex effettiv kontra RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H jew RNase minn Aspergillus.Murine RNase impeditur ġie ttestjat minn RT-PCR, RT-qPCR u IVT mRNA, u kien kompatibbli ma 'diversi Reverse transcriptases kummerċjali, DNA polymerases u RNA polymerases.
Meta mqabbel mal-inibituri tal-RNase tal-bniedem, l-inibitur tal-RNase murini ma fihx żewġ cysteines li huma sensittivi ħafna għall-ossidazzjoni li tikkawża l-inattivazzjoni tal-inibitur.Li jagħmilha stabbli f'konċentrazzjonijiet baxxi ta 'DTT (inqas minn 1 mM).Din il-karatteristika tagħmilha adattata għall-użu f'reazzjonijiet fejn konċentrazzjonijiet għoljin ta' DTT huma negattivi għar-reazzjoni (eż. RT-PCR f'ħin reali).
Aapplikazzjoni
Dan il-prodott jista 'jintuża b'mod wiesa' fi kwalunkwe esperiment fejn l-interferenza RNase hija possibbli biex tiġi evitata d-degradazzjoni tal-RNA, bħal:
1.Sinteżi tal-ewwel linja ta 'cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, eċċ.
2.Jipproteġi l-RNA mid-degradazzjoni waqt traskrizzjoni/traduzzjoni in vitro (eż., sistema ta 'replikazzjoni virali in vitro).
3.Inibizzjoni tal-attività RNase waqt is-separazzjoni u l-purifikazzjoni tal-RNA.
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Il-prodott jista 'jinħażen f'-25～- 15 ℃, validu għal sentejn.
Buffer tal-ħażna
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT u 50% gliċerol.
Definizzjoni ta' unità
L-ammont ta 'inibitur ta' RNase murina meħtieġ biex jinibixxi l-attività ta '5ng ta' ribonuclease A b'50% kien definit bħala unità waħda (U).
Piż molekulari tal-proteina
Il-piż molekulari ta 'l-inibitur ta' RNase murina huwa 50 kDa.
Kontroll tal-kwalità
Exonuclease Attività:
40 U ta 'inibitur ta' RNase murina b'1 μg λ -Hind III diġest DNA f'37 ℃ għal 16-il siegħa ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforesi tal-ġel tal-agarose.
Attività Endonuclease:
40 U ta 'inibitur ta' RNase murina b'1μ g λ DNA f'37 ℃ għal 16-il siegħa ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose.
Nicking Attività:
40U ta 'inibitur ta' RNase murina b'1μ g pBR322 f'37 ℃ għal 16-il siegħa ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose.
RNase Attività:
40U ta 'inibitur ta' RNase murina b'1.6μ g MS2 RNA għal 4h f'37℃ ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġell tal-agarose.
E.coli DNA:
40 U ta' inibitur ta' RNase murina jiġi skrinjat għall-preżenza tad-DNA ġenomika ta' E. coli bl-użu ta' TaqMan qPCR b'primers speċifiċi għall-locus rRNA ta' E. coli 16S.Il-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika ta' E. coli hija ≤ 0.1 pg/40 U.
Notes
1.Oxxillazzjoni jew tħawwad vjolenti se jwasslu għal inattivazzjoni ta 'l-enzimi.
2.Il-firxa ta 'temperatura ottima ta' dan l-inibitur kienet 25-55 ℃, u Kienet inattivata f'65 ℃ u aktar.
3.L-attivitajiet ta 'RNase H, RNase 1 u RNase T1 ma kinux inibiti minn inibitur ta' RNase murini.
4.L-inibizzjoni tal-attività RNase instabet f'firxa wiesgħa ta 'pH (pH 5-9 kienu kollha attivi), u l-ogħla attività kienet osservata f'pH 7-8.
5.Peress li r-ribonukleażi tipikament iżommu attività taħt kundizzjonijiet ta' denaturazzjoni, għandha tingħata attenzjoni biex jiġu evitati molekuli ta' Inibitur ta' RNase denaturati li jkunu kkumplessaw ma' ribonuclease.Biex jiġi evitat ir-rilaxx ta 'ribonuclease attiv, temperaturi akbar minn 50 °C u konċentrazzjonijiet għoljin ta' urea jew aġenti oħra denaturanti għandhom jiġu evitati.
