M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase

Cat Nru:HC2004A

Pakkett: 0.1ml/1ml/5ml

Neoscript Reverse Transcriptase hija reverse transcriptase miksuba permezz ta' screening ta' mutazzjoni tal-ġene M-MLV tal-oriġini u l-espressjoni tal-virus tal-lewkimja murina Moloney f'E.coli.

Ibgħat Inkjesta

Deskrizzjoni tal-prodott

Dettall tal-prodott

Neoscript Reverse Transcriptase hija reverse transcriptase miksuba permezz ta' screening ta' mutazzjoni tal-ġene M-MLV tal-oriġini u l-espressjoni tal-virus tal-lewkimja murina Moloney f'E.coli.L-enzima tneħħi l-attività RNase H, għandha tolleranza ta 'temperatura ogħla, u hija adattata għal traskrizzjoni inversa f'temperatura għolja.Għalhekk, huwa utli biex jiġu eliminati l-effetti mhux favorevoli tal-istruttura ta 'livell għoli tal-RNA u fatturi mhux speċifiċi fuq is-sinteżi tal-cDNA, u għandu stabbiltà ogħla u kapaċità ta' sintesi ta 'traskrizzjoni inversa.L-enzima għandha stabbiltà ogħla u kapaċità ta 'sinteżi ta' traskrizzjoni inversa.

Preċedenti: M-MLV Reverse Transcriptase HC2003B

Li jmiss: M-MLV Reverse Transcriptase (Ħieles Glycerol) HC2005A

Komponenti

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

2.5 × Buffer tal-Ewwel Strand (mhux obbligatorju)

* 5 × First-Strand Buffer ma fihx dNTP, jekk jogħġbok żid dNTPs meta tħejji s-sistema ta' reazzjoni

Applikazzjoni Rakkomandata

1.QRT-PCR f'pass wieħed.

2.Sejbien tal-virus RNA.

Kundizzjoni tal-Ħażna

-20 ° C għal ħażna fit-tul, għandhom jitħalltu sew qabel l-użu, jevitaw frekwenti iffriżar-tidwib.

Definizzjoni ta' Unità

Unità waħda tinkorpora 1 nmol ta' dTTP f'10 minuti f'37°C bl-użu ta' poly(A)•oligo(dT)₂₅bħala template/primer.

Kontroll tal-Kwalità

1.Purità elettroforetika SDS-PAGE akbar minn 98%.

2.Sensittività ta 'amplifikazzjoni, kontroll minn lott għal lott, stabbiltà.

3.L-ebda attività nukleażi eżoġena, l-ebda kontaminazzjoni eżoġena ta 'endonuclease jew exonuclease

Setup ta' Reazzjoni għall-Ewwel Soluzzjoni ta' Reazzjoni Katina

1.Preparazzjoni tat-taħlita ta' reazzjoni

Komponenti	Volum
Oligo(dT)_12-₁₈Primer jew Primer Random^a Jew Primers Speċifiċi tal-Ġene^b	50 pmol
	50 pmol (20-100 pmol)
	2 pmol
10 mM dNTP	1 μL
Mudell RNA	RNA totali≤ 5μg;mRNA≤ 1 μg
dH mingħajr RNase₂O	Sa 10 μL

Noti:a/b: Jekk jogħġbok agħżel tipi differenti ta 'primers skond il-bżonnijiet sperimentali tiegħek.

2.Saħħan f'65°C għal 5 minuti u kessaħ malajr fuq is-silġ għal 2 minuti.

3.Żid il-komponenti li ġejjin mas-sistema ta’ hawn fuq għal volum totali ta’ 20µL u ħawwad bil-mod:

Komponenti	Volum (μL)
5 × Buffer tal-Ewwel Strand	4
Neoscript Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1
Inibitur RNase (40 U/μL)	1
dH mingħajr RNase₂O	Sa 20 μL

4.Jekk jogħġbok wettaq ir-reazzjoni skont il-kundizzjonijiet li ġejjin:

(1) Jekk jintuża Random Primer, ir-reazzjoni għandha titwettaq f'25℃ għal 10mins, u mbagħad f'50℃ għal 30 ~ 60mins;

(2) Jekk jintużaw Oligo dT jew primers speċifiċi, ir-reazzjoni għandha titwettaq f'50℃ għal 30 ~ 60mins.

5.Saħħan f'95℃ għal 5 minuti biex inattiva Neoscript Reverse Transcriptase u ttemm ir-reazzjoni.

6.Il-prodotti tat-traskrizzjoni inversa jistgħu jintużaw direttament fir-reazzjoni tal-PCR u fir-reazzjoni PCR kwantitattiva tal-fluworexxenza, jew maħżuna f'-20 ℃ għal żmien twil.

PCR REazzjoni:

1.Preparazzjoni tat-taħlita ta' reazzjoni

Komponenti	Konċentrazzjoni
10 × PCR Buffer (dNTP ħieles, Mg²+ ħieles)	1×
dNTPs (10mM kull dNTP)	200 μM
25 mM MgCl₂	1-4 mM
Taq DNA Polymerase (5U/μL)	2-2.5 U
Primer 1 (10 μM)	0.2-1 μM
Primer 2 (10 μM)	0.2-1 μM
Mudell^a	≤10% Soluzzjoni ta' l-Ewwel Reazzjoni Katina (2 μL)
ddH₂O	Sa 50 μL

Noti:a: Jekk tiżdied wisq soluzzjoni ta 'l-ewwel reazzjoni tal-katina, ir-reazzjoni tal-PCR tista' tiġi inibita.

2.Proċedura ta' Reazzjoni tal-PCR

Pass	Temperatura	Ħin	Ċikli
Denaturazzjoni minn qabel	95℃	2-5 minuti	1
Denaturazzjoni	95℃	10-20 sek	30-40
Ittemprar	50-60℃	10-30 sek
Estensjoni	72℃	10-60 sek

Noti

1.Adattat għall-ottimizzazzjoni tat-temperatura tat-traskrizzjoni inversa fil-medda ta '42℃ ~ 55℃.

2.Għandu stabbiltà aħjar, huwa adattat għal amplifikazzjoni ta 'traskrizzjoni inversa b'temperatura għolja.Barra minn hekk, huwa favorevoli biex jgħaddi b'mod effiċjenti minn reġjuni strutturali kumplessi ta 'RNA.Ukoll, danhuwa adattat għal skoperta kwantitattiva ta' fluworexxenza multiplex f'pass wieħed RT-PCR.

3.Kompatibilità tajba ma 'diversi enzimi ta' amplifikazzjoni tal-PCR u hija adattata għal reazzjonijiet RT-PCR ta 'sensittività għolja.

4.Adattat għal reazzjoni kwantitattiva ta 'RT-PCR ta' fluworexxenza ta 'pass wieħed ta' sensittività għolja, ittejjeb b'mod effettiv ir-rata ta 'skoperta ta' konċentrazzjoni baxxa ta 'mudelli.

5.Adattat għall-kostruzzjoni tal-librerija cDNA.