Waħda Pass RT-qPCR SYBR Ħadra Premix
Cat Nru: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix huwa għall-kwantifikazzjoni tal-fluworexxenza bbażata fuq iż-żebgħa SYBR Green I.Bl-użu ta 'primers speċifiċi għall-ġeni, traskrizzjoni inversa u reazzjonijiet qPCR jitlestew f'tubu wieħed, u jeliminaw il-ħtieġa għal operazzjonijiet ripetuti ta' ftuħ ta 'tapp u pipetting, ittejjeb ħafna l-effiċjenza tal-assaġġ u tnaqqas ir-riskju ta' kontaminazzjoni.Għal kampjuni ta 'RNA, il-kit juża Reverse Transcriptase reżistenti għas-sħana għal sinteżi effiċjenti ta' cDNA u HotStart Taq DNA Polymerase għal amplifikazzjoni kwantitattiva.Taħt is-sistema ta 'buffer ottimizzata, is-sensittività tal-kit tista' tkun għolja daqs 0.1 pg għal miri espressi ħafna u għoli daqs 1 pg għal miri moderatament espressi.Il-kit huwa adattat għall-amplifikazzjoni u l-kwantifikazzjoni tal-kampjuni tad-DNA.Jippermetti l-iskoperta sensittiva u l-kwantifikazzjoni ta 'aċidi nuklejċi minn kampjuni differenti ta' pjanti u annimali, ċelloli u mikro-organiżmi.
Komponenti
| No | Isem | Volum | Volum |
| 1 | Buffer Avvanzat | 250 μL | 2 × 1.25 mL |
| 2 | Taħlita ta' Enżimi Avvanzati | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Ħieles H2O | 250 μL | 2 × 1.25 mL |
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Dan il-prodott għandu jinħażen f'-25 ~ -15 ℃ 'il bogħod mid-dawl għal sena.
Istruzzjonijiet
1.Konfigurazzjoni tas-sistema ta 'reazzjonid
| Komponenti | Volum (μL) | Volum (μL) | Konċentrazzjoni finali |
| Buffer Avvanzat | 12.5 | 25 | 1× |
| Taħlita ta' Enżimi Avvanzati | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Ħieles H2Oc | sa 25 | sa 50 | - |
Noti:
1) a.TIl-konċentrazzjoni finali tal-primer kienet 0.2 μmol/L, li setgħet tiġi aġġustata wkoll bejn 0.1 u 1μmol/L kif xieraq.
2) b.Ir-reaġent huwa estremament sensittiv, b'RNA Totali fil-medda ta '1pg-1μg, u l-ittestjar ta' kampjuni umani wera input ottimali ta '1 pg-100 ng, li jikkontrolla għal valur Ct ġenerali fil-medda ta' 15-30 kif xieraq.
3) ċ.Huwa rakkomandat li tuża 20μL jew 50μL biex tiżgura l-validità u r-riproduċibilità tal-amplifikazzjoni tal-ġene fil-mira.
4) d.Jekk jogħġbok ipprepara fil-bank ultra-nadif u uża ponot u tubi ta 'reazzjoni mingħajr residwi ta' nuclease;tips bi skrataċ tal-filtru huma rakkomandati.Evita l-kontaminazzjoni inkroċjata u l-kontaminazzjoni tal-ajrusol.
2.Programm ta' reazzjoni
| Pass taċ-ċiklu | Temp. | Ħin | Ċikli |
| Traskrizzjoni inversa | 50℃a | 6mins | 1 |
| Denaturazzjoni inizjali | 95℃ | 5mins | 1 |
| Reazzjoni ta 'amplifikazzjoni | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Stadju tal-kurva tat-tidwib | Defaults tal-Istrumenti | 1 | |
Noti:
1) a.It-temperatura tat-traskrizzjoni inversa tista 'tintgħażel bejn 50-55 ° C skond il-ħtiġijiet sperimentali.Għal kampjuni tad-DNA, il-proċess ta' traskrizzjoni inversa jista' jitħalla barra.
2) b.F'każijiet speċjali t-temperatura ta 'l-ittemprar/estensjoni tista' tiġi aġġustata skond il-valur Tm tal-primer, 60 ° C huwa rakkomandat.
Noti
1. Dan il-prodott huwa għal użu ta 'riċerka biss.
2. Jekk jogħġbok operat b'kowtijiet tal-laboratorju u ingwanti li jintremew, għas-sigurtà tiegħek.
