Rnase A
Ribonuclease A(RNaseA) huwa polypeptide single-stranded li fih 4 rabtiet disulfide b'piż molekulari ta 'madwar 13.7 kDa.RNase A hija endoribonuclease li speċifikament tiddegrada RNA single-stranded f'residwi C u U.Speċifikament, il-qsim jirrikonoxxi r-rabta phosphodiester iffurmata mill-5'-ribose ta 'nukleotide u l-grupp fosfat fuq it-3'-ribose tan-nukleotide pyrimidine adjaċenti, sabiex il-fosfati 2,3'-Cyclic jiġu idrolizzati għat-3 korrispondenti 'nukleoside phosphates (eż., pG-pG-pC-pA-pG huwa maqtugħ minn RNase A biex jiġġenera pG-pG-pCp u A-PG).RNase A huwa l-aktar attiv fil-qsim ta' RNA single-stranded.Il-konċentrazzjoni tax-xogħol rakkomandata hija 1- 100 μ G/mL, kompatibbli ma 'diversi sistemi ta' reazzjoni.Konċentrazzjoni baxxa tal-melħ (0-100 mM NaCl) tista 'tintuża biex tnaqqas RNA ta' linja waħda, RNA ta 'stranded doppju, u ktajjen RNA ffurmati minn ibridizzazzjoni RNA-DNA.
Madankollu, f'konċentrazzjoni għolja ta 'melħ (≥0.3 M), RNase A biss jaqsam speċifikament l-RNA b'linja waħda.
RNase A huwa l-aktar komunement użat biex jitneħħa l-RNA waqt il-preparazzjoni ta 'DNA plasmid jew DNA ġenomika.Jekk id-DNase huwiex attiv jew le matul il-proċess ta 'preparazzjoni jista' faċilment jaffettwa r-reazzjoni.Il-metodu tradizzjonali ta 'togħlija f'banju ta' l-ilma jista 'jintuża biex inattiva l-attività tad-DNase.Dan il-prodott ma fihx DNase u protease, u ma jeħtieġx trattament bis-sħana qabel l-użu.Barra minn hekk, dan il-prodott jista 'jintuża wkoll f'esperimenti ta' bijoloġija molekulari bħal analiżi tal-protezzjoni RNase u analiżi tas-sekwenza RNA.
Kundizzjonijiet tal-ħażna
Il-prodott għandu jinħażen f'-25 ℃ ~ - 15 ℃ għal sentejn.
Speċifikazzjonijiet
| Dehra | Trab |
| Kwantità | 100mg / 1g |
| Tip ta' prodott | RNase A |
Istruzzjonijiet
Dan huwa wieħed mill-metodi komuni għall-preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-ħażna RNase A.Jista 'wkoll jiġi ppreparatb’metodi oħra skont il-metodi tradizzjonali fil-laboratorju jew letteratura ta’ referenza (bħaltinħall direttament f'10 mM Tris-HCl, pH 7.5 jew soluzzjoni Tris-NaCl)
1. Uża 10 mM aċetat tas-sodju (pH 5.2) biex tħejji 10 mg/mL ta' soluzzjoni għall-ħażna ta' RNase A.
2. Tisħin f'100 ℃ għal 15-il minuta.
3. Kessaħ għat-temperatura tal-kamra, żid 1/10 volum ta' 1 M Tris-HCl (pH 7.4), aġġusta l-pH tiegħu għal 7.4 (għależempju, żid 500 mL ta 'soluzzjoni ta' ħażna ta '10 mg/mL RNase 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. Sottoppakkjat f'-20℃ għal ħażna ffriżata, li tista 'tkun stabbli sa sentejn.
[Noti]:
Meta togħlija soluzzjoni RNaseA taħt kundizzjonijiet newtrali, se tifforma preċipitazzjoni RNase;Għalliha f'pH aktar baxx, u jekk ikun hemm preċipitazzjoni, jista 'jiġi osservat, li jista' jkun ikkawżat mill-preżenza ta 'impuritajiet tal-proteini.Jekk is-sediment jinstab wara t-togħlija, l-impuritajiet jistgħu jitneħħew permezz ta 'ċentrifugazzjoni b'veloċità għolja (13000rpm), u mbagħad ippakkjati sub-ippakkjati għall-ħażna tal-iffriżar.
Noti
Jekk jogħġbok ilbes il-PPE meħtieġ, kowt tal-laboratorju u ingwanti bħal dawn, biex tiżgura s-saħħa u s-sigurtà tiegħek.
