Robustart Taq DNA Polymerase

Robustart Taq DNA Polymerase hija DNA polimerażi hot start.Dan il-prodott jista 'mhux biss jinibixxi aħjar ir-reazzjoni mhux speċifika kkawżata mill-ittemprar mhux speċifiku ta' primers jew aggregazzjoni ta 'primer fil-proċess ta' preparazzjoni u amplifikazzjoni tas-sistema PCR.Għalhekk, għandu speċifiċità eċċellenti u huwa aktar effettiv għall-amplifikazzjoni ta 'mudelli ta' konċentrazzjoni baxxa, u huwa adattat għal reazzjoni ta 'amplifikazzjoni PCR multiplexed.Barra minn hekk, dan il-prodott għandu applikabilità tajba ħafna, u riżultati stabbli ta 'amplifikazzjoni jistgħu jinkisbu f'tipi differenti ta' reazzjonijiet PCR.

Komponenti

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ ħieles) (mhux obbligatorju)

3.25 mM MgCl₂(mhux obbligatorju)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ ħieles) ma fihx dNTP u Mg²+, jekk jogħġbok żid dNTPs u MgCl₂meta tkun qed tipprepara s-sistema ta’ reazzjoni.

Applikazzjonijiet Rakkomandati

1.Amplifikazzjoni mgħaġġla.

2.Amplifikazzjoni multipla.

3.Amplifikazzjoni diretta ta 'demm, tampuni, u kampjuni oħra.

4.Sejbien ta' mard respiratorju.

Kundizzjoni tal-Ħażna

-20 ° C għal ħażna fit-tul, għandhom jitħalltu sew qabel l-użu, jevitaw frekwenti iffriżar-tidwib.

*Jekk isseħħ preċipitazzjoni wara t-tkessiħ, huwa normali;huwa rakkomandat li tiġi ekwilibrata għat-temperatura tal-kamra qabel it-taħlit u l-użu.

Definizzjoni ta' Unità

Unità attiva waħda (U) hija definita bħala l-ammont ta 'enżima li tinkorpora 10 nmol ta' deoxyribonucleotide f'materjal li ma jinħallx fl-aċidu f'74 ° C għal 30 minuta bl-użu tad-DNA tal-isperma tas-salamun attivat bħala template/primer.

Kontroll tal-Kwalità

1.Purità elettroforetika SDS-PAGE akbar minn 98%.

2.Sensittività ta 'amplifikazzjoni, kontroll minn lott għal lott, stabbiltà.

3.L-ebda attività nukleażi eżoġena, l-ebda kontaminazzjoni eżoġena ta 'endonuclease jew exonuclease

Istruzzjonijiet

Setup tar-Reazzjoni

Noti:

1) a.Il-buffer ma fihx dNTP u Mg²+, jekk jogħġbok żid dNTPs u MgCl₂meta tkun qed tipprepara s-sistema ta’ reazzjoni.

2) b.Jekk jintuża għal qPCR/qRT-PCR, sondi fluworexxenti għandhom jiġu miżjuda mas-sistema ta 'reazzjoni.Normalment, konċentrazzjoni ta 'primer finali ta' 0.2 μM tagħti riżultati tajbin;jekk il-prestazzjoni tar-reazzjoni hija fqira, il-konċentrazzjoni tal-primer tista 'tiġi aġġustata fil-medda ta' 0.2-1 μM.Il-konċentrazzjoni tas-sonda hija ġeneralment ottimizzata fil-medda ta '0.1-0.3 μM.Jistgħu jsiru esperimenti ta 'gradjent ta' konċentrazzjoni biex tinstab l-aħjar kombinazzjoni ta 'primer u sonda.

Protokoll ta 'ċikliżmu termali

Noti

1.Ir-rata ta' amplifikazzjoni ta' DNA polymerase mgħaġġla m'għandhiex tkun inqas minn 1 kb/10 s.Ir-rata ta 'żieda u tnaqqis fit-temperatura, il-mod ta' kontroll tat-temperatura u l-effiċjenza tal-konduzzjoni tas-sħana ta 'strumenti PCR differenti jvarjaw ħafna, għalhekk huwa rakkomandat li jiġu ottimizzati l-aħjar kundizzjonijiet ta' reazzjoni għall-istrument speċifiku tal-PCR mgħaġġel.

2.Is-sistema hija adattabbli ħafna, b'ispeċifiċità u sensittività ogħla.

3.Adattat għall-użu bħala reaġenti ta 'skoperta PCR ta' sensittività għolja, u jista 'jintuża f'reazzjonijiet ta' amplifikazzjoni tal-PCR multiplex.

4.5′→3′ attività tal-polimerażi, attività 5′→3′ exonuclease;ebda attività 3′→5′ exonuclease;l-ebda funzjoni ta 'qari tal-provi.

5.Adattat għall-ittestjar kwalitattiv u kwantitattiv ta 'PCR u RT-PCR.

6.It-tarf 3′ tal-prodott PCR huwa A, li jista 'jiġi kklonat direttament f'vettur T.

7.Il-metodu ta 'tliet stadji huwa rakkomandat għal primers b'temperaturi baxxi ta' ttemprar jew għall-amplifikazzjoni ta 'frammenti itwal minn 200 bp.