Enżimi UDG/UNG
UDG (uracil DNA glycosylase) jista 'jikkatalizza l-idroliżi tar-rabta N-glycosidic bejn il-bażi ta' uracil u s-sinsla ta 'zokkor-fosfat f'ssDNA u dsDNA.Jista 'faċilment jikkontrolla t-tniġġis tal-ajrusol u huwa adattat għal sistemi komuni ta' bijoloġija molekulari bħal PCR, qPCR, RT-qPCR u LAMP.
Speċifikazzjonijiet
| Espressjoni Ospitanti | E. coli rikombinanti mal-ġene uracil DNA glycosylase |
| Piż Molekulari | 24. 8kDa |
| Purità | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inattivazzjoni tas-Sħana | 95℃, 5~10 min |
| Definizzjoni ta' Unità | Unità waħda (U) hija definita bħala l-ammont ta 'enzima li meħtieġa biex tikkatalizza l-idroliżi ta' dsDNA li fih l μg dU fi 30 minuta f'25℃. |
Ħażna
Il-prodott għandu jinħażen f'-25 ℃ ~ -15 ° C għal sentejn.
Istruzzjonijiet
1.Preparazzjoni tat-taħlita ta' reazzjoni PCR skond is-sistema li ġejja
| Komponenti | Volum (μL) | Konċentrazzjoni finali |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Lissija |
| Mudell tad-DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Sa 50 | - |
Nota: Skont ir-rekwiżiti sperimentali, il-konċentrazzjoni finali ta 'dUTP tista' tiġi aġġustata bejn 0.2-0.6 mmol/L, u 0.2 mmol/L dTTP jistgħu jiġu miżjuda b'mod selettiv.
2.Proċedura ta' amplifikazzjoni
| Pass taċ-ċiklu | Temperatura | Ħin | Ċikli |
| Degradazzjoni tal-mudell li jkun fiha dU | 25℃ | 10 minuti | 1 |
| Attivazzjoni UDG, denaturazzjoni inizjali tal-mudell | 95℃ | 5 ~ 10 minuti | 1 |
| Denaturazzjoni | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Ittemprar | 60℃ | 20 sek | |
| Estensjoni | 72℃ | 30sec/kb | |
| Estensjoni finali | 72℃ | 5 min | 1 |
Nota: Il-ħin ta 'reazzjoni f'25 ° C jista' jiġi aġġustat fi żmien 5-10 minuti skond ir-rekwiżiti sperimentali.
Noti
1.UDG huwa attiv fil-biċċa l-kbira tal-buffers tar-reazzjoni tal-PCR.
2.L-enzimi għandhom jinħażnu f'kaxxa tas-silġ jew fuq banju tas-silġ meta jintużaw, u għandhom jinħażnu f'-20 ° C immedjatament wara l-użu.
3.Jekk jogħġbok ilbes il-PPE meħtieġ, kowt tal-laboratorju u ingwanti bħal dawn, biex tiżgura s-saħħa u s-sigurtà tiegħek!
