Multiplex qPCR Probe Premix
Cat Nru: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) hija pre-soluzzjoni għal 2 × amplifikazzjoni PCR kwantitattiva f'ħin reali kkaratterizzata minn sensittività u speċifiċità għolja, li hija ta 'kulur blu, u għandha l-effett taż-żieda tal-kampjun.Dan il-prodott huwa reaġent imħallat minn qabel 2× Ħallat li jippermetti sa erba' reazzjonijiet PCR kwantitattivi fluworexxenti f'reazzjoni waħda bir-reazzjoni.Dan il-prodott fih il-metodu ta 'antikorpi modifikat ġenetikament għall-enżima Taq hot-start, li jtejjeb ħafna s-sensittività u l-ispeċifiċità tal-amplifikazzjoni.Fl-istess ħin, dan il-prodott ottimizza ħafna l-buffer b'ħafna reazzjonijiet, li jista 'jtejjeb l-effiċjenza ta' amplifikazzjoni tar-reazzjoni u jippromwovi l-amplifikazzjoni effettiva ta 'mudelli ta' konċentrazzjoni baxxa.Dan il-prodott jista 'jintuża għall-ġenotipi u l-analiżi kwantitattiva multiplex.
Speċifikazzjoni
| Bidu sħun | Mibnija fil-bidu sħun |
| Metodu ta 'skoperta | Sejbien tal-primer-sonda |
| Metodu PCR | qPCR |
| Polimerażi | Taq DNA polymerase |
| Tip ta' kampjun | DNA |
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Il-prodott jintbagħat bis-silġ niexef u jista 'jinħażen f'-25 ~ -15 ℃ għal sentejn.
Istruzzjonijiet
1. ReazzjoniSistema
| Komponenti | Volum (μL) | Konċentrazzjoni Finali |
| 2 × TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Taħlita tal-primer (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Taħlita tas-sonda (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Żebgħa ta' referenza Rox | 0.5 | 1× |
| Mudell tad-DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | sa 25 | - |
Noti:Ħallat sewwa qabel l-użu biex tevita bżieżaq eċċessivi minn tħawwad qawwi.
a.Konċentrazzjoni tal-Primer: Primer Mix fiha pari multipli ta 'primers, ġeneralment kull primer f'konċentrazzjoni finali ta' 0.2 μmol/L u tista 'wkoll tiġi aġġustata bejn 0.1 u 0.5 μmol/L kif xieraq.
b.Konċentrazzjoni tas-sonda: Probe Mix fiha sondi multipli b'sinjali ta 'fluworexxenza differenti, u l-konċentrazzjoni ta' kull sonda tista 'tiġi aġġustata bejn 50 u 250 nmol/L skont sitwazzjoni speċifika.
1.Referenza taż-żebgħa Rox: Jintuża fuq strument ta 'amplifikazzjoni tal-PCR Real Time bħal Applied Biosystems biex jikkoreġi l-iżball tas-sinjal tal-fluworexxenza ġġenerat bejn il-bjar;dan il-prodott ma fihx referenza taż-żebgħa Rox.Cas#10200 huwa rakkomandat jekk meħtieġ.
2.Dilwizzjoni tal-mudell: qPCR huwa sensittiv ħafna, u huwa rakkomandat li l-mudell jiġi dilwit għall-użu.Jekk il-mudell huwa soluzzjoni stokk ta' cDNA, il-volum tal-mudell m'għandux jaqbeż 1/10 tal-volum totali.
3.Sistema ta 'reazzjoni: 25μL, 30μL jew 50 μL hija rrakkomandata biex tiżgura l-effettività u r-ripetibilità tal-amplifikazzjoni tal-ġene fil-mira.
4.Preparazzjoni tas-sistema: Jekk jogħġbok ipprepara fil-bank super nadif, u uża t-truf u t-tubi ta 'reazzjoni mingħajr residwu ta' nuclease;huwa rakkomandat li tuża l-ponot bi skrataċ tal-filtru.Evita l-kontaminazzjoni inkroċjata u l-kontaminazzjoni tal-ajrusol.
2.Programm ta' reazzjoni
| Pass taċ-ċiklu | Temp. | Ħin | Ċikli |
| Inizjali-denaturazzjoni | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturazzjoni | 95 ℃ | 15sec | 45 |
| Ittemprar/Estensjoni | 60 ℃ | 30sec |
Noti:
1.Ittemprar/Estensjoni: It-temperatura u l-ħin jistgħu jiġu aġġustati b'mod xieraq skont il-valur Tm tal-primer iddisinjat.
2.Akkwist tas-sinjal tal-fluworexxenza: Il-ħin tal-akkwist tas-sinjal tal-fluworexxenza meħtieġ għal strumenti ta 'skoperta qPCR differenti huwa differenti, jekk jogħġbok issettja skont il-limitu ta' żmien minimu.Il-ħin ta' diversi strumenti komuni huwa stabbilit kif ġej:
20 sek: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sek: Applied Biosystems 7300
32 sek: Applied Biosystems 7500
Noti
Jekk jogħġbok ilbes il-PPE meħtieġ, kowt tal-laboratorju u ingwanti bħal dawn, biex tiżgura s-saħħa u s-sigurtà tiegħek!
