BspQI
BspQI jista' jiġi espress b'mod rikombinanti f'E. coli li jistgħu jirrikonoxxu siti speċifiċi u huma prodotti taħt
BspQI, endonukleażi ta' restrizzjoni ta' endonuclease ta' restrizzjoni IIs, hija derivata minn razza ta' E. coli rikombinanti li ġġorr il-ġen BspQI kklonat u modifikat minn Bacillus sphaericus.Jista 'jirrikonoxxi siti speċifiċi, u s-sekwenza ta' rikonoxximent u s-siti tal-qsim huma kif ġej:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Karatteristiċi tal-Prodott
1. Attività għolja, Diġestjoni mgħaġġla;
2. Attività tal-istilla baxxa, li tiżgura qtugħ preċiż bħal "scalpel";
3. Mingħajr BSA u ħielsa mill-annimali;
Sensittività tal-metilazzjoni
Dam metilazzjoni:Mhux Sensittivi;
Dċm metilazzjoni:Mhux Sensittivi;
CpG Metilazzjoni:Mhux Sensittivi;
Kundizzjonijiet tal-ħażna
Il-prodott għandu jintbagħat ≤ 0℃;Aħżen f'kundizzjoni ta '-25 ~ - 15 ℃.
Buffer tal-ħażna
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Albumina rikombinanti, 0. 1% Trition X- 100 u 50% gliċerol (pH 7.0 @ 25°C).
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta' enzima meħtieġ biex tiddiġerixxi 1µg ta' DNA ta' kontroll Intern f'siegħa f'50°C f'volum ta' reazzjoni totali ta' 50 µL.
Kontroll tal-Kwalità
Assaġġ tal-Purità tal-Proteina (SDS-PAGE):Il-purità ta 'BspQI kienet ≥95% determinata mill-analiżi SDS-PAGE.
RNase:10U ta 'BspQI b'1.6μg MS2 RNA għal 4 sigħat f'50℃ ma jagħti l-ebda degradazzjoni kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose.
Attività tad-DNase mhux Speċifika:10U ta 'BspQI b'1μg λ DNA f'50 ℃ għal 16-il siegħa, meta mqabbel ma' 50 ℃ għal siegħa, ma jagħti l-ebda DNA żejjed kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel agarose.
Ligazzjoni u Qtugħ:Wara d-diġestjoni ta' 1 μg λDNA b'10U BspQI, frammenti tad-DNA jistgħu jiġu ligati b'T4 DNA ligase f'temperatura ta' 16ºC.U dawn il-frammenti ligated jistgħu jiġu recut b'BspQI.
E. coli DNA: L-iskoperta ta 'TaqMan qPCR ta' E. coli 16s speċifiku għall-rDNA wriet li residwu tal-ġenoma ta 'E.coli ≤ 0.1pg/ul.
Residwu tal-proteina ospitanti:≤ 50 ppm
Batterjali Endotossina: LAL-test, skont l-edizzjoni tal-Farmakopea Ċiniża IV 2020, metodu tat-test tal-limitu tal-ġel, regola ġenerali (1143).Il-kontenut ta' endotossina batterjali għandu jkun ≤10 EU/mg.
Sistema ta' reazzjoni u kundizzjonijiet
| Komponent | Volum |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 μL |
| dd H2O | Sa 50 μL |
Kundizzjonijiet ta 'reazzjoni: 50 ℃, 1 ~ 16 h.
Inattivazzjoni tas-sħana: 80 ° C għal 20 min.
Is-sistema u l-kundizzjonijiet ta 'reazzjoni rakkomandati jistgħu jipprovdu effett ta' diġestjoni tal-enzimi relattivament tajjeb, li huwa għal referenza biss, jekk jogħġbok irreferi għar-riżultati sperimentali għad-dettalji.
Applikazzjoni tal-prodott
Restrizzjoni tad-diġestjoni endonuclease, Klonazzjoni rapida.
Noti
1. Il-volum ta 'enżima ≤ 1/10 tal-volum ta' reazzjoni.
2. L-attività tal-istilla tista 'sseħħ meta l-konċentrazzjoni tal-gliċerol tkun aktar minn 5%.
3. L-attività ta 'qsim tista' sseħħ meta s-Substrat taħt il-proporzjon rakkomandat.
