Kit tal-Ġenotipi tal-Ġurdien

Cat Nru: HCR2021A

Dan il-prodott huwa kit iddisinjat għall-identifikazzjoni rapida tal-ġenotipi tal-ġrieden, inkluża l-estrazzjoni tad-DNA mhux raffinata u s-sistema ta 'amplifikazzjoni tal-PCR.Il-prodott jista 'jintuża għall-amplifikazzjoni tal-PCR direttament minn denb tal-ġurdien, widna, toe u tessuti oħra wara qsim sempliċi minn Lysis Buffer u Proteinase k.L-ebda diġestjoni matul il-lejl, estrazzjoni tal-fenol-kloroform jew purifikazzjoni tal-kolonna, li hija sempliċi u tqassar iż-żmien tal-esperimenti.Il-prodott huwa adattat għall-amplifikazzjoni ta 'frammenti fil-mira sa 2kb u reazzjonijiet PCR multiplex b'sa 3 pari ta' primers.It-2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix fih DNA polymerase ta' inġinerija ġenetika, Mg²⁺, dNTPs u sistema ta 'buffer ottimizzata biex tipprovdi effiċjenza għolja ta' amplifikazzjoni u tolleranza ta 'inibitur, sabiex ir-reazzjonijiet tal-PCR ikunu jistgħu jitwettqu billi żżid template u primers u jerġa' jiġi idratat il-prodott għal 1×.Il-prodott PCR amplifikat b'dan il-prodott għandu bażi prominenti "A" fit-tarf 3′ u jista 'jintuża direttament għall-klonazzjoni TA wara l-purifikazzjoni.

Komponenti

Kundizzjonijiet tal-Ħażna

Il-prodotti għandhom jinħażnu f'-25 ~ -15 ℃ għal sentejn.Wara li jinħall, Lysis Buffer jista 'jinħażen f'2 ~ 8 ℃ għal użu multiplu għal żmien qasir, u ħawwad sew meta tuża.

Applikazzjoni

Dan il-prodott huwa adattat għall-analiżi ta 'knockout tal-ġrieden, skoperta transġenika, ġenotipi u l-bqija.

Karatteristiċi

1.Operazzjoni sempliċi: l-ebda ħtieġa li jiġi estratt DNA ġenomika;

2.Applikazzjoni wiesgħa: adattata għall-amplifikazzjoni diretta ta 'diversi tessuti tal-ġrieden.

Istruzzjonijiet

1.Rilaxx ta 'DNA ġenomika

1) Preparazzjoni ta 'lysate

Lisat tat-tessut huwa ppreparat skont in-numru ta 'kampjuni tal-ġrieden li għandhom jiġu lisati (lisat tat-tessut għandu jiġi ppreparat fuq il-post skont id-dożaġġ u mħallat sewwa għall-użu), u l-proporzjon ta' reaġenti meħtieġa għal kampjun wieħed huwa kif ġej:

2) Preparazzjoni tal-Kampjun u Liżi

Użu Rakkomandat tat-Tessuti

Ħu ammont xieraq ta 'kampjuni tat-tessut tal-ġrieden f'tubi ċentrifugi nodfa, żid 200μL ta' lisat ta 'tessut frisk ma' kull tubu ċentrifugu, vortex u ħawwad, imbagħad inkuba f'55℃ għal 30mins, u mbagħad saħħan f'98℃ għal 3mins.

3) Ċentrifazzjoni

Ħawwad il-lisat sew u ċentrifuga fi 12,000 rpm għal 5 minuti.Is-supernatant jista' jintuża bħala mudell għall-amplifikazzjoni tal-PCR.Jekk il-mudell huwa meħtieġ għall-ħażna, ittrasferixxi s-supernatant għal tubu ċentrifugu sterili ieħor u aħżen f'-20 ℃ għal ġimgħatejn.

2.Amplifikazzjoni tal-PCR

Neħħi t-2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix minn -20℃ u ħoll fuq is-silġ, ħallat rasu 'l isfel u pprepara s-sistema ta' reazzjoni tal-PCR skont it-tabella li ġejja (opera fuq is-silġ):

Nota:

a) L-ammont miżjud m'għandux jaqbeż 1/10 tas-sistema, u jekk jiżdied wisq, l-amplifikazzjoni tal-PCR tista 'tiġi inibita.

Kundizzjonijiet PCR Rakkomandati

Nota:

a) Temperatura ta 'l-ittemprar: B'referenza għall-valur Tm tal-primer, huwa rakkomandat li t-temperatura ta' l-ittemprar tiġi stabbilita għall-valur Tm iżgħar tal-primer +3 ~ 5 ℃.

Problemi u Soluzzjonijiet Komuni

1.Ebda strixxi mmirati

1) Prodott liżi eċċessiv.Agħżel l-aktar ammont xieraq ta 'mudell, ġeneralment mhux aktar minn 1/10 tas-sistema;

2) Daqs tal-kampjun kbir wisq.Iddilwa l-lysate 10 darbiet u mbagħad amplifika, jew tnaqqas id-daqs tal-kampjun u terġa 'tiġi liżi;

3) Il-kampjuni tat-tessuti mhumiex friski.Huwa rakkomandat li tuża kampjuni ta 'tessut frisk;

4) Kwalità fqira tal-primer.Uża DNA ġenomika għall-amplifikazzjoni biex tivverifika l-kwalità tal-primer u tottimizza d-disinn tal-primer.

2.Amplifikazzjoni mhux speċifika

1) It-temperatura ta 'l-ittemprar hija baxxa wisq u n-numru taċ-ċiklu huwa għoli wisq.Żid it-temperatura ta 'l-ittemprar u tnaqqas in-numru ta' ċikli;

2) Il-konċentrazzjoni tal-mudell hija għolja wisq.Naqqas l-ammont ta 'mudell jew iddilwa l-mudell 10 darbiet wara l-amplifikazzjoni;

3) Speċifiċità tal-primer fqira.Ottimizza d-disinn tal-primer.

Noti

1.Sabiex tiġi evitata l-kontaminazzjoni inkroċjata bejn il-kampjuni, għandhom jiġu ppreparati għodod multipli ta 'kampjunar, u l-wiċċ ta' l-għodda jista 'jitnaddaf b'soluzzjoni ta' ipoklorit tas-sodju 2% jew cleaner ta 'aċidu nuklejku wara kull teħid ta' kampjuni jekk ikun meħtieġ użu ripetut.

2.Huwa rakkomandat li tuża tessuti friski tal-ġurdien, u l-volum tal-kampjuni m'għandux ikun kbir wisq biex tevita li taffettwa r-riżultati tal-amplifikazzjoni.

3.Lysis Buffer għandu jevita friża-tidwib frekwenti, u jista 'jinħażen f'2 ~ 8 ℃ għal użu multiplu għal żmien qasir.Jekk tinħażen f'temperatura baxxa, tista 'sseħħ preċipitazzjoni, u għandha tinħall għal kollox qabel l-użu.

4.Il-PCR Mix għandu jevita friża-tidwib frekwenti, u jista 'jinħażen f'4℃ għal użu ripetut għal żmien qasir.

5.Dan il-prodott huwa biss għal riċerka sperimentali xjentifika u m'għandux jintuża f'dijanjosi jew trattament kliniku.