Universali SYBR GREEN qPCR Premix (Blu)

Cat Nru: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) hija pre-soluzzjoni għal 2 × amplifikazzjoni kwantitattiva PCR f'ħin reali kkaratterizzata minn sensittività u speċifiċità għolja, hija ta 'kulur blu, u għandha l-effett ta' traċċar ta 'żieda ta' kampjun.Il-komponent tal-qalba Taq DNA polymerase juża antikorp hot start biex effettivament jinibixxi amplifikazzjoni mhux speċifika minħabba l-ittemprar tal-primer waqt il-preparazzjoni tal-kampjun.Fl-istess ħin, il-formula żżid il-fatturi ta 'promozzjoni biex ittejjeb l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni tar-reazzjoni tal-PCR u tqabbel l-amplifikazzjoni tal-ġeni b'kontenuti GC differenti (30 ~ 70%), sabiex il-PCR kwantitattiv ikun jista' jikseb relazzjoni lineari tajba f'livell kwantitattiv wiesa ' reġjun.Dan il-prodott fih Żebgħa ta' Referenza Passiva ROX speċjali, li hija applikabbli għall-biċċa l-kbira tal-istrumenti qPCR.Mhuwiex meħtieġ li tiġi aġġustata l-konċentrazzjoni ta 'ROX fuq strumenti differenti.Huwa meħtieġ biss li żżid primers u mudelli biex tipprepara s-sistema ta 'reazzjoni għall-amplifikazzjoni.

Komponenti

Universal Blue qPCR Master Mix

Kundizzjonijiet tal-ħażna

Il-prodott jintbagħat b'pakketti tas-silġ u jista 'jinħażen f'-25 ℃ ~ -15 ℃ għal 18-il xahar.Huwa meħtieġ li tiġi evitata irradjazzjoni qawwija tad-dawl meta taħżen jew tipprepara s-sistema ta 'reazzjoni.

Speċifikazzjoni

Istruzzjonijiet

1.Sistema ta 'Reazzjoni

[Nota]: Ħallat sewwa qabel l-użu biex tevita bżieżaq eċċessivi minn tħawwad qawwi.

a) Konċentrazzjoni tal-primer: Il-konċentrazzjoni tal-primer finali hija 0.2μmol/L, u tista 'wkoll tiġi aġġustata bejn 0.1 u 1.0μmol/L kif xieraq.

b) Konċentrazzjoni tal-mudell: Jekk il-mudell huwa soluzzjoni stokk ta 'cDNA mhux dilwit, il-volum użat m'għandux jaqbeż 1/10 tal-volum totali tar-reazzjoni qPCR.

c) Dilwizzjoni tal-mudell: Huwa rakkomandat li s-soluzzjoni tal-istokk tal-cDNA tiġi dilwita b'5-10 darbiet.L-aħjar ammont ta 'mudell miżjud huwa aħjar meta l-valur Ct miksub bl-amplifikazzjoni huwa 20-30 ċiklu.

d) Sistema ta 'reazzjoni: Huwa rakkomandat li tuża 20μL jew 50μL biex tiżgura l-effettività u r-ripetibbiltà tal-amplifikazzjoni tal-ġene fil-mira.

e) Preparazzjoni tas-sistema: Jekk jogħġbok ipprepara fil-bank super nadif u uża t-truf u tubi ta 'reazzjoni mingħajr residwu tan-nukleażi;huwa rakkomandat li tuża l-ponot bi skrataċ tal-filtru.Evita l-kontaminazzjoni inkroċjata u l-kontaminazzjoni tal-ajrusol.

2.Programm ta' reazzjoni

Programm Standard

Programm ta 'malajr

[Nota]: Il-programm mgħaġġel huwa adattat għall-maġġoranza l-kbira tal-ġeni, u programmi standard jistgħu jiġu ppruvati għal ġeni ta 'struttura sekondarja kumplessa individwali.

a) It-temperatura u l-ħin tal-ittemprar: Jekk jogħġbok aġġusta skont it-tul tal-primer u l-ġene fil-mira.

b) Akkwist tas-sinjal tal-fluworexxenza (★): Jekk jogħġbok issettja l-proċedura sperimentali skont ir-rekwiżiti fl-istruzzjonijiet għall-użu tal-istrument.

c) Kurva tat-tidwib: Il-programm default ta 'l-istrument jista' jintuża normalment.

3. Analiżi tar-Riżultati 

Minimu ta 'tliet repliki bijoloġiċi kienu meħtieġa għal esperimenti kwantitattivi.Wara r-reazzjoni, il-kurva ta 'amplifikazzjoni u l-kurva tat-tidwib jeħtieġ li jiġu kkonfermati.

3.1 Kurva ta' amplifikazzjoni:

Il-kurva ta 'amplifikazzjoni standard hija forma ta' S.L-analiżi kwantitattiva hija l-aktar preċiża meta l-valur Ct jaqa 'bejn 20 u 30. Jekk il-valur Ct huwa inqas minn 10, huwa meħtieġ li l-mudell jiġi dilwit u jerġa' jitwettaq it-test.Meta l-valur Ct ikun bejn 30-35, huwa meħtieġ li tiżdied il-konċentrazzjoni tal-mudell jew il-volum tas-sistema ta 'reazzjoni, sabiex tittejjeb l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni u tiġi żgurata l-eżattezza tal-analiżi tar-riżultat.Meta l-valur Ct ikun akbar minn 35, ir-riżultati tat-test ma jistgħux janalizzaw kwantitattivament l-espressjoni tal-ġene, iżda jistgħu jintużaw għal analiżi kwalitattiva.

3.2 Kurva tat-tidwib:

Il-quċċata waħda tal-kurva tat-tidwib tindika li l-ispeċifiċità tar-reazzjoni hija tajba u tista 'titwettaq analiżi kwantitattiva;jekk il-kurva tat-tidwib turi qċaċet doppji jew multipli, ma tistax titwettaq analiżi kwantitattiva.Il-kurva tat-tidwib turi qċaċet doppji, u huwa meħtieġ li jiġi ġġudikat jekk il-quċċata mhux fil-mira hijiex primer dimer jew amplifikazzjoni mhux speċifika permezz ta 'elettroforesi tal-ġell tal-agarose tad-DNA.Jekk huwa primer dimer, huwa rakkomandat li titnaqqas il-konċentrazzjoni tal-primer jew iddisinja mill-ġdid il-primers b'effiċjenza għolja ta 'amplifikazzjoni.Jekk hija amplifikazzjoni mhux speċifika, jekk jogħġbok żid it-temperatura ta 'l-ittemprar, jew iddisinja mill-ġdid il-primers b'ispeċifiċità.

Noti

Jekk jogħġbok ilbes il-PPE meħtieġ, kowt tal-laboratorju u ingwanti bħal dawn, biex tiżgura s-saħħa u s-sigurtà tiegħek!

Dan il-prodott huwa għal użu ta 'riċerka BISS!