Inibitur Rnase (Ħieles gliċerol)
Murine RNase inhibitor huwa inibitur rikombinanti RNase murina espress u purifikat minn E.coli.Jingħaqad ma' RNase A, B jew C fi proporzjon 1:1 permezz ta 'twaħħil mhux kovalenti, u b'hekk jinibixxi l-attività tat-tliet enzimi u jipproteġi l-RNA mid-degradazzjoni.Madankollu, Mhuwiex effettiv kontra RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H jew RNase minn Aspergillus.Murine RNase impeditur ġie ttestjat minn RT-PCR, RT-qPCR u IVT mRNA, u kien kompatibbli ma 'diversi Reverse transcriptases kummerċjali, DNA polymerases u RNA polymerases.
Meta mqabbel mal-inibituri tal-RNase tal-bniedem, l-inibitur tal-RNase murini ma fihx żewġ cysteines li huma sensittivi ħafna għall-ossidazzjoni li tikkawża l-inattivazzjoni tal-inibitur.Li jagħmilha stabbli f'konċentrazzjonijiet baxxi ta 'DTT (inqas minn 1 mM).Din il-karatteristika tagħmilha adattata għall-użu f'reazzjonijiet fejn konċentrazzjonijiet għoljin ta' DTT huma negattivi għar-reazzjoni (eż. RT-PCR f'ħin reali).
Aapplikazzjoni
Dan il-prodott jista 'jintuża b'mod wiesa' fi kwalunkwe esperiment fejn l-interferenza RNase hija possibbli biex tiġi evitata d-degradazzjoni tal-RNA, bħal:
1.Sinteżi ta 'cDNA ta' l-ewwel linja, RT-PCR, RT-qPCR, eċċ.;
2.Ipproteġi l-RNA mid-degradazzjoni fi traskrizzjoni/traduzzjoni in-vitro (eż. replikazzjoni virali in vitro);
3.Inibizzjoni ta 'attività ta' RNase waqt iżolament u purifikazzjoni ta 'RNA.
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Aħżen f'-25～-15℃;
Ċikli ta' ffriżar-tidwib ≤ 5 darbiet;
Validu għal sena.
Definizzjoni ta' unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta' RNase Inhibitor meħtieġ biex jinibixxi l-attività ta' 5 ng ta' RNase A b'50%.
Piż molekulari
RNase Inhibitor (mingħajr glycerol) huwa proteina ta' 50 kDa.
Kontroll tal-kwalità
Exonuclease Attività:
L-inkubazzjoni ta' 40 U ta' enzima b'1 μg λ-Hind III diġest DNA għal 16-il siegħa f'37°C ma rriżultat fl-ebda degradazzjoni li tinkixef tad-DNA kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel.
Attività Endonuclease:
L-inkubazzjoni ta' 40 U ta' enzima b'1 μg λ DNA għal 16-il siegħa f'37°C ma rriżultat fl-ebda degradazzjoni tad-DNA li tinkixef kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel.
Nicking Attività:
L-inkubazzjoni ta '40 U ta' enzima b'1 μg pBR322 għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma rriżultat fl-ebda degradazzjoni li tista 'tinkiseb tad-DNA kif determinat mill-elettroforesi tal-ġel.
RNase Attività:
L-inkubazzjoni ta' 40 U ta' enzima b'1.6 μg MS2 RNA għal 4 sigħat f'37℃ ma rriżultat f'ebda degradazzjoni li tinkixef tal-RNA kif determinat mill-elettroforeżi tal-ġel.
E.coli DNA:
40 U ta' Enżima jinstab minn TaqMan qPCR.Id-DNA ta 'E.coli huwa ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.Tħawwadx jew tħawwadx b'mod vjolenti biex tevita l-inattivazzjoni tal-enzimi.
L-inibitur 2.RNase huwa attiv f'temperaturi li jvarjaw minn 25℃ sa 55℃ u huwa inattivat f'≥65℃.
3.L-attività ta 'RNase H, RNase 1, u RNase T1 mhix inibita.
4.Il-firxa tal-pH għall-inibizzjoni tal-attività RNase hija wiesgħa (attiva f'pH 5-9), li tesibixxi attività massima f'pH 7-8.
