Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) huwa polypeptide single-stranded li fih 4 rabtiet disulfide b'piż molekulari ta 'madwar 13.7 kDa.RNase A hija endoribonuclease li tiddegrada speċifikament RNA single-stranded f'residwi C u U.Speċifikament, il-qsim jirrikonoxxi r-rabta phosphodiester iffurmata mill-5′-ribose ta 'nukleotide u l-grupp tal-fosfat fuq it-3′-ribose tan-nukleotide pyrimidine adjaċenti, sabiex il-2, 3′-phosphates ċikliċi jiġu idrolizzati għat-3 korrispondenti ′fosfati tan-nukleosidi (eż. pG-pG-pC-pA-pG jinqasam minn RNase A biex jiġġenera pG-pG-pCp u A-PG).RNase A huwa l-aktar attiv fil-qsim ta' RNA single-stranded.Il-konċentrazzjoni tax-xogħol rakkomandata hija 1-100μG/mL, kompatibbli ma 'diversi sistemi ta' reazzjoni.Konċentrazzjoni baxxa tal-melħ (0-100 mM NaCl) tista 'tintuża biex tnaqqas RNA ta' linja waħda, RNA ta 'stranded doppju, u ktajjen RNA ffurmati minn ibridizzazzjoni RNA-DNA.Madankollu, f'konċentrazzjoni għolja ta 'melħ (≥0.3 M), RNase A biss jaqsam speċifikament RNA single-stranded.
RNase A huwa l-aktar komunement użat biex jitneħħa l-RNA waqt il-preparazzjoni tad-DNA tal-plasmid jew DNA ġenomika. Jekk DNase huwa attiv jew le matul il-proċess ta 'preparazzjoni jista' faċilment jaffettwa r-reazzjoni.Il-metodu tradizzjonali ta 'togħlija f'banju ta' l-ilma jista 'jintuża biex inattiva l-attività tad-DNase.Dan il-prodott ma fihx DNase u protease, u ma jeħtieġx trattament bis-sħana qabel l-użu.Barra minn hekk, dan il-prodott jista 'jintuża wkoll f'esperimenti ta' bijoloġija molekulari bħal analiżi tal-protezzjoni RNase u analiżi tas-sekwenza RNA.
Kundizzjonijiet tal-Ħażna
Il-prodott jista 'jinħażen f'-25~-15 ℃, validu għal sentejn.
Istruzzjonijiet
Dan huwa wieħed mill-metodi komuni għall-preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-ħażna RNase A.Jista 'wkoll jiġi ppreparat minnmetodi oħra skont il-metodi tradizzjonali fil-laboratorju jew letteratura ta’ referenza (bħaltinħall direttament f'10 mM Tris-HCl, pH 7.5 jew soluzzjoni Tris-NaCl)
1. Uża 10 mM aċetat tas-sodju (pH 5.2) biex tħejji 10 mg/mL ta' soluzzjoni għall-ħażna ta' RNase A
2. Tisħin f'100 ℃ għal 15-il minuta
3. Kessaħ għat-temperatura tal-kamra, żid 1/10 volum ta '1 M Tris-HCl (pH 7.4), aġġusta l-pH tiegħu għal 7.4 (għależempju, żid 500 ml ta 'soluzzjoni ta' ħażna 10g/ml RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sottoppakkjat f'-20℃ għal ħażna ffriżata, li tista 'tkun stabbli sa 2 snin.
[Noti]: Meta tgħalli s-soluzzjoni ta 'RNaseA taħt kundizzjonijiet newtrali, se tifforma preċipitazzjoni ta' RNase;Għalliha f'pH aktar baxx, u jekk ikun hemm preċipitazzjoni, jista 'jiġi osservat, li jista' jkun ikkawżat mill-preżenza ta 'impuritajiet tal-proteini.Jekk is-sediment jinstab wara t-togħlija, l-impuritajiet jistgħu jitneħħew permezz ta 'ċentrifugazzjoni b'veloċità għolja (13000rpm), u mbagħad sub-ippakkjati għall-ħażna tal-iffriżar.
Informazzjoni dwar il-prodott
| Sinonimi | Ribonuclease I;Ribonukleażi tal-frixa;Ribonuclease 3'-pirimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS Nru. | 9001-99-4 |
| Dehra | Trab lajofilizzat abjad |
| Piż molekulari | ~ 13.7kDa (sekwenza ta' aċidi amminiċi) |
| Valur Ph | 7.6 (firxa ta' attività 6-10) |
| Temperatura xierqa | 60℃ (firxa ta' attività 15-70℃) |
| Aġent li jattiva | Na2+.K+ |
| Inibitur | Rnase Inibitur |
| Metodu ta' inattivazzjoni | Ma jistax jiġi inattivat bit-tisħin, huwa ssuġġerit li tuża kolonna ċentrifuga |
| Oriġini | Bovini |
| Solubilità | Jinħall fl-ilma (10mg/ml) |
| Telf fuq niexef | ≤5.0% |
| Attività ta' l-enżimi | ≥60 unità Kunitz/mg |
| Punt iżoelettriku | 9.6 |
Noti
Għas-sigurtà u s-saħħa tiegħek, jekk jogħġbok ilbes kowtijiet tal-laboratorju u ingwanti li jintremew għall-operazzjoni.
