Selvaġġ Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase hija DNA polimerażi termostabbli minn Thermus aquaticus YT-1, li tippossjedi attività ta' polimerażi 5′→3′ u attività endonukleażi flap 5′.
Komponenti
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq Buffer | 2 × 1 mL | 2 × 10 mL | 2 × 50 mL | 5 × 200 mL |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5 × 10 mL |
Kundizzjoni tal-Ħażna
Trasport taħt 0°C u jinħażen f'-25°C~-15°C.
Definizzjoni ta' Unità
Unità waħda hija definita bħala l-ammont ta 'enżima li tinkorpora 15 nmol ta' dNTP f'materjal li ma jinħallx fl-aċidu fi 30 minuta f'75°C.
Kontroll tal-Kwalità
1.Assaġġ tal-Purità tal-Proteina (SDS-PAGE):Il-purità ta' Taq DNA polymerase kienet ≥95% determinata permezz ta' analiżi SDS-PAGE.
2.EndAttività onukleażi:Minimu ta' 5 U ta' Taq DNA polymerase b'1 μg λDNA għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma jirriżulta f'ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.
3.Attività Exonuclease:Minimu ta' 5 U ta' Taq DNA polymerase b'1 μg λ -Hind Ⅲ diġestiva tad-DNA għal 16-il siegħa f'37 ℃ ma jirriżulta f'ebda degradazzjoni skoperta kif determinat.
4.Attività Nickase:Minimu ta' 5 U ta' Taq DNA polymerase b'1 μg pBR322 DNA għal 16-il siegħa f'temperatura ta' 37°C ma jirriżulta f'ebda degradazzjoni li tinkixef kif determinat.
5.Attività RNase:Minimu ta' 5 U ta' Taq DNA polymerase b'1.6 μg MS2 RNA għal 16-il siegħa f'temperatura ta' 37°C ma jirriżulta f'ebda degradazzjoni skoperta kif determinat.
6.E. coliDNA:5 U ta' Taq DNA polymerase tiġi skrinjata għall-preżenza ta' DNA ġenomika ta' E. coli bl-użu ta' TaqMan qPCR b'primers speċifiċi għal E. coli 16S rRNA locus.Il-kontaminazzjoni tad-DNA ġenomika ta' E. coli hija ≤1 Kopja.
7.Amplifikazzjoni PCR (5.0 kb Lambda DNA)- Reazzjoni ta' 50 µL li fiha 5 ng Lambda DNA b'5 unitajiet ta' Taq DNA Polymerase għal 25 ċiklu ta' amplifikazzjoni PCR tirriżulta fil-prodott mistenni ta' 5.0 kb.
Setup tar-Reazzjoni
| Komponenti | Volum |
| Mudell tad-DNAa | fakultattiv |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| Ħallat dNTP (10mM kull wieħed) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Ilma mingħajr nukleażi | Sa 50 μL |
Noti:
1) L-aħjar konċentrazzjoni ta 'reazzjoni ta' mudelli differenti hija differenti.It-tabella li ġejja turi l-użu rrakkomandat tal-mudell tas-sistema ta’ reazzjoni ta’ 50 µL.
| DNA | Ammont |
| Ġenomika | 1 ng-1 μg |
| Plasmid jew Viral | 1 pg-1 ng |
2) L-aħjar konċentrazzjoni ta 'Taq DNA Polymerase tista' tvarja minn 0.25 µL~1 µL f'applikazzjonijiet speċjalizzati.
ReazzjoniProgramm
| Pass | Temperatura(°C) | Ħin | Ċikli |
| Denaturazzjoni inizjalia | 95 ℃ | 5mins | - |
| Denaturazzjoni | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Ċikli |
| Ittemprarb | 60 ℃ | 15 s | |
| Estensjoni | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Estensjoni Finali | 72 ℃ | 5mins | - |
Noti:
1) Il-kundizzjoni ta 'denaturazzjoni inizjali hija adattata għall-biċċa l-kbira tar-reazzjonijiet ta' amplifikazzjoni u tista 'tiġi modifikata skont il-kumplessità tal-istruttura tal-mudell.Jekk l-istruttura tal-mudell hija kumplessa, il-ħin ta 'qabel id-denaturazzjoni jista' jiġi estiż għal 5 - 10mins biex itejjeb l-effett inizjali tad-denaturazzjoni.
2) It-temperatura ta 'l-ittemprar jeħtieġ li tiġi aġġustata skont il-valur Tm tal-primer, li ġeneralment huwa ssettjat għal 3 ~ 5 ℃ inqas mill-valur Tm tal-primer;Għal mudelli kumplessi, huwa meħtieġ li taġġusta t-temperatura ta 'l-ittemprar u testendi l-ħin ta' estensjoni biex tinkiseb amplifikazzjoni effiċjenti.
